Polimeraza zanjiri reaktsiyasi (PCR) har qanday bosqichda (o'tkir yoki surunkali) irsiy patologiyalarni, infektsiyalarni, virusli kasalliklarni, shuningdek, patogenlarni aniqlash orqali kasallikning aniq namoyon bo'lishidan oldin tashxislash sohasidagi yuqori aniqlikdagi usuldir. bemordan olingan namunalarda genetik material bo'lgan ularning DNK, RNK lariga asoslanadi. Va bugun biz polimeraza zanjiri reaktsiyasi (PCR) usullarining mohiyati, diagnostika bosqichlari va tamoyillari, shuningdek uning narxi haqida gapiramiz.

Polimeraza zanjiri reaktsiyasi nima

Tahlilning asosini kuchaytirish (ikki marta ko'paytirish) - inson genetik kompleksini ifodalovchi DNKning (deoksiribonuklein kislotasi) qisqa bo'limidan ko'plab nusxalarni yaratishdir. Tadqiqot uchun juda oz miqdordagi fiziologik moddalar (balg'am, najas, epiteliy qirib tashlash, prostata shirasi, qon, sperma, amniotik suyuqlik, shilliq, platsenta to'qimalari, siydik, tupurik, plevra suyuqligi, miya omurilik suyuqligi) talab qilinadi. Bunday holda, masalan, bemorning urogenital tizimida hatto bitta zararli mikrob ham aniqlanishi mumkin.

PCR texnikasi (polimeraza zanjiri reaktsiyasi) 1993 yilda Nobel mukofotiga sazovor bo'lgan amerikalik olim K. Mullis tomonidan ishlab chiqilgan.

Faol ishlatiladi:

• infektsiyalarni erta tashxislashda, genetik,;
• tadqiqot uchun juda oz miqdordagi DNK mavjud bo'lgan sud-tibbiy ekspertizasida;
• veterinariya, farmatsevtika, biologiya, molekulyar genetika;
• shaxsni DNK orqali aniqlash, otalikni tasdiqlash uchun;
• paleontologiya, antropologiya, ekologiya (mahsulot sifatini, atrof-muhit omillarini kuzatishda).

Ushbu video sizga polimeraza zanjiri reaktsiyasi nima ekanligini aytib beradi:

Kimga tayinlangan

Yuqumli kasalliklarni tashxislashda polimeraza zanjiri reaktsiyasi yuqori aniqlik va ishonchlilikning eng ishonchli usullaridan biridir. Masalan, xlamidiya va boshqa ko'plab patogenlar uchun PCR tahlilining ishonchliligi 100% ga (mutlaq) yaqinlashadi. Ko'pincha polimeraza zanjiri reaktsiyasi protsedurasi tashxis qo'yishda ma'lum bir patogenni aniqlashda qiynaladigan bemorlarga buyuriladi.

Laboratoriya PCR testi qo'llaniladi:

• ekinlar yoki immunologik usullar yordamida aniqlash qiyin bo'lgan siydik va genital organlarning infektsiyasini keltirib chiqaradigan patogenlarni aniqlash;
• dastlabki tahlilning ijobiy, ammo shubhali natijasi bo'lsa (masalan, OITS bilan kasallangan ota-onalardan yangi tug'ilgan chaqaloqlarda) dastlabki bosqichda OIVni qayta tashxislash uchun;
• erta bosqichda onkologik kasallikni aniqlash (onkogen mutatsiyalarni o'rganish) va muayyan bemor uchun davolash rejimini individual tuzatish;
• irsiy patologiyalarni erta aniqlash va potentsial davolash maqsadida.

Shunday qilib, kelajakdagi ota-onalar genetik patologiyaning tashuvchisi yoki yo'qligini aniqlash uchun sinovdan o'tkaziladi, bolalarda PCR irsiy kasallikka duchor bo'lish ehtimolini aniqlaydi.

• homiladorlikning dastlabki bosqichida homila patologiyalarini aniqlash (o'sayotgan embrionning individual hujayralari mumkin bo'lgan mutatsiyalar uchun tekshiriladi);
• organlarni transplantatsiya qilishdan oldin bemorlarda - "to'qimalarni tiplash" uchun (to'qimalarning mosligini aniqlash);
• donorlik qonida xavfli patogen organizmlarni aniqlash;
• yangi tug'ilgan chaqaloqlarda - yashirin infektsiyalarni aniqlash;
• antiviral va antimikrobiyal davolash natijalarini baholash.

Nima uchun bu protseduradan o'tish kerak?

PCR deyarli 100% natija beradigan yuqori samarali diagnostika usuli bo'lganligi sababli, protsedura qo'llaniladi:

• yakuniy tashxisni tasdiqlash yoki rad etish;
• terapiya samaradorligini tezkor baholash.

Ko'pgina hollarda, agar boshqa bakteriologik, immunologik va virusologik diagnostika usullari foydasiz bo'lsa, PCR rivojlanayotgan kasallikni aniqlashning yagona mumkin bo'lgan testidir.

• Viruslar infektsiyadan so'ng darhol va kasallik belgilari paydo bo'lishidan oldin PCR orqali aniqlanadi. Virusni erta aniqlash tezda davolanishga imkon beradi.
• "Virusli yuk" (yoki tanadagi viruslar soni) deb ataladigan DNK miqdoriy tahlili bilan ham aniqlanadi.
• O'ziga xos patogenlar (masalan, Koch tubercle tayoqchasi) qiyin va ekish uchun juda uzoq vaqt talab etiladi. PCR tahlili tadqiqot uchun qulay bo'lgan namunalardagi patogenlarning minimal sonini (tirik va o'lik) tezda aniqlash imkonini beradi.

Patogen DNKning batafsil tahlili qo'llaniladi:

• antibiotiklarning muayyan turlariga nisbatan sezgirligini aniqlash, bu sizga darhol davolanishni boshlash imkonini beradi;
• uy, yovvoyi hayvonlar orasida epidemiyalar tarqalishini nazorat qilish;
• oldingi epidemiyalarni qo'zg'atgan yangi yuqumli mikrob turlarini va patogen subtiplarini aniqlash va monitoring qilish.

Diagnostika turlari

Standart usul

Polimeraza zanjiri reaktsiyasini tahlil qilish maxsus primer fermentlar yordamida ma'lum bir DNK va RNK fragmentini ko'p marta kuchaytirish (ikki marta ko'paytirish) asosida amalga oshiriladi. Nusxa ko'chirish zanjiri natijasida tadqiqot uchun etarli miqdorda material olinadi.

Jarayon davomida faqat kerakli fragment nusxalanadi (belgilangan aniq shartlarga mos keladi), hatto u namunada mavjud bo'lsa ham.

Foydali diagrammalar bilan ushbu batafsil video PCR qanday ishlashini aytadi:

Boshqa usullar

• Haqiqiy vaqtda PCR. Ushbu turdagi tadqiqotda berilgan DNK fragmentini aniqlash jarayoni 30-40 tsiklning butun zanjiri tugagandan keyin emas, balki har bir tsikldan keyin boshlanadi. Ushbu turdagi tadqiqot organizmdagi patogen (virus yoki mikrob) miqdori haqida ma'lumot olish, ya'ni miqdoriy tahlil qilish imkonini beradi.
• RT-PCR (teskari transkripsiya rejimi). Ushbu tahlil genetik asosi RNK bo'lgan viruslarni (masalan, gepatit C virusi, immunitet tanqisligi virusi) aniqlash uchun bir zanjirli RNKni topish uchun ishlatiladi. Bunday tadqiqotda maxsus ferment - teskari transkriptaza va ma'lum bir primer ishlatiladi va RNK asosida bir zanjirli DNK quriladi. Keyin bu zanjirdan ikkinchi DNK zanjiri tiklanadi va standart protsedura bajariladi.

Tutish uchun ko'rsatmalar

PCR protsedurasi yuqumli kasalliklar, neonatologiya, akusherlik, pediatriya, urologiya, ginekologiya, venerologiya, nevrologiya, nefrologiya, oftalmologiya klinikasida qo'llaniladi.

Tahlil qilish uchun ko'rsatmalar:

• irsiy patologiyalar ehtimoli bo'lgan bolada genetik anormalliklarning rivojlanish xavfini aniqlash;
• homiladorlikni rejalashtirishda ikkala ota-onaga yoki davom etayotgan homiladorlik davrida onaning og'ir ahvoliga tashxis qo'yish;
• kontseptsiya bilan bog'liq qiyinchiliklar, bepushtlik sabablarini aniqlash;
• o'tkir bosqichda va ularning surunkali holatga o'tish belgilari bilan jinsiy infektsiyalarga shubha qilish;
• noaniq kelib chiqishi yallig'lanish jarayonlarining sabablarini aniqlash;
• himoyalanmagan tasodifiy va doimiy jinsiy aloqalar;
• patogen mikroorganizmning o'ziga xos antibiotiklarga sezgirligini aniqlash;
• Yashirin infektsiyaga shubha qilingan bemorlarda patogenlarni aniq simptomlar paydo bo'lishidan oldin aniqlash (klinikgacha tashxis);
• bemorlar kasallikdan keyin tiklanishni tasdiqlash uchun (retrospektiv tashxis);

Diagnostika quyidagi patogenlarni aniq aniqlash zarur bo'lganda ham qo'llaniladi:

• gepatit viruslari (A B C G), inson immunitet tanqisligi, sitomegalovirus;
• vibrion vabo;
• herpes simplex virusi, herpetiform turlari;
• retro-adeno- va rinoviruslar;
• qizilcha viruslari, Epstein-Barr, varikella (Zoster - virus);
• parvo va pikornaviruslar;
• Helicobacter pylori bakteriyasi;
• legionellalar, ichak tayoqchasining patogen turlari;
• staphylococcus aureus;
• patogen;
• Klostridiya, difteriya va Haemophilus influenzae;

Shuningdek, u infektsiyalarni aniqlash uchun ishlatiladi:

• Yuqumli mononuklyoz;
• borrelioz, listerioz, Shomil bilan yuqadigan ensefalit;
• Candida qo'ziqorinlari keltirib chiqaradigan kandidoz;
• jinsiy infektsiyalar - trichomoniasis, ureaplazmoz, rangpar treponema, gardnerellyoz, gonoreya, mikoplazmoz, xlamidiya;
• sil kasalligi.

O'tkazish uchun kontrendikatsiyalar

Jarayon bemor bilan, tanaga hech qanday ta'sir ko'rsatmasdan, lekin tadqiqot uchun olingan biologik material bilan amalga oshirilmaganligi sababli, potentsial xavf yo'qligi sababli PCR uchun kontrendikatsiyalar yo'q.

Shu bilan birga, kolposkopiya jarayonidan keyin bachadonning servikal kanalidan biomaterial namunasi o'tkazilmaydi. Tahlil qilish uchun smearlarni, qirqishlarni etkazib berishga faqat hayz ko'rish tugaganidan va bo'shatish to'liq to'xtaganidan keyin 4-6 kun o'tgach ruxsat etiladi.

Usul xavfsizmi?

Laboratoriyada uning biomaterialini izolyatsiya qilingan holda o'rganish bemorga salbiy ta'sir ko'rsatishi mumkin emas.

Jarayonga tayyorgarlik (tahlil uchun biologik moddalarni etkazib berish)

Chet el patogenining DNKsi aniqlangan PCR tahlili uchun namuna sifatida har qanday biologik suyuqlik, to'qima, tana sekretsiyasi ishlatiladi. Sinov moddasidan namuna olish venadan qon olish, halqum, burun bo'shlig'i, siydik yo'llari, plevra bo'shlig'i, bachadon bo'yni qirqish shaklida amalga oshiriladi.

Diagnostika jarayonidan oldin shifokor bemorga qanday material olinishini tushuntiradi:

1. Jinsiy infektsiyalarni tekshirganda, jinsiy a'zolardan sekretsiyalar, siydik va siydik yo'lidan surtma olinadi.
2. Herpetik infektsiyalarni, sitomegalovirusni, mononuklyozni tahlil qilishda - ular siydikni, tahlil qilish uchun tomoqni, gepatitni, toksoplazmozni - tomirdan qon oladi.
3. Turli xil diagnostika qilish uchun miya omurilik suyuqligi olinadi.
4. Pulmonologiyada tahlil qilish uchun namunalar balg'am va plevral suyuqlikdir.
5. Homiladorlik davrida mumkin bo'lgan intrauterin infektsiyalarni o'rganishda tahlil qilish uchun amniotik suyuqlik va platsenta hujayralari qo'llaniladi.

Tahlilning ishonchliligi va aniqligi materialni olishda sharoitlarning sterilligiga bog'liq. PCR testi juda sezgir bo'lganligi sababli, sinov moddasining har qanday ifloslanishi natijani buzishi mumkin.

Biomaterialni yetkazib berish uchun malakali tayyorgarlik bemorlar uchun hech qanday qiyinchilik tug'dirmaydi. Muayyan tavsiyalar mavjud:

• jinsiy infektsiyalarni tahlil qilishda:
  • materialni etkazib berishdan 72 soat oldin yaqin aloqalarni istisno qiling;
  • 3 kun davomida har qanday vaginal mahsulotlardan foydalanishni to'xtating;
  • oldingi kunning kechqurunidan boshlab, o'rganilayotgan hududning gigienasini bajarmang;
  • uretradan namuna olishda 3-4 soat davomida siyishni istisno qiling;
• infektsiyalarni tekshirishdan bir oy oldin antibiotiklarni qabul qilishni to'xtatish;
• ertalab ovqat va ichishdan oldin qon topshirish;
• siydikning birinchi ertalabki qismini yig'ish yaxshilab intim hojatxonadan keyin steril idishda amalga oshiriladi.

Polimeraza zanjiri reaktsiyasi usuli yordamida diagnostika qanday amalga oshirilishi haqida ko'proq o'qing.

Jarayon qanday

Reaktorda (kuchaytirgich yoki termal sikl) qayta-qayta PCR tadqiqotini o'tkazishda ma'lum tsikllar takrorlanadi:

1. Birinchi qadam denaturatsiyadir. Tuprik, qon, biopsiya, ginekologik namunalar, patogenning DNK (yoki RNK) mavjudligi shubha qilingan balg'am kuchaytirgichga joylashtiriladi, bu erda material isitiladi va DNK ikkita alohida zanjirga bo'linadi.
2. Ikkinchi bosqich - materialni yumshatish yoki ozgina sovutish. va unga DNK molekulasidagi kerakli bo'limlarni tanib, ularga bog'lay oladigan primerlarni qo'shish.
3. Uchinchi bosqich - cho'zish- DNK zanjirlarining har biriga 2 ta primer qo'shilgandan keyin sodir bo'ladi. Jarayon davomida patogenning DNK qismi tugallanadi va uning nusxasi hosil bo'ladi.

Bu tsikllar "zanjirli reaktsiya" kabi takrorlanadi, har safar ma'lum bir DNK fragmenti (masalan, ma'lum bir virus dasturlashtirilgan segment) nusxalarining ikki baravar ko'payishiga olib keladi. Bir necha soat ichida DNK fragmentining ko'plab nusxalari hosil bo'ladi va ularning namunadagi mavjudligi aniqlanadi. Shundan so'ng, natijalar tahlil qilinadi va infektsiya turini aniqlash uchun turli xil patogenlar ma'lumotlar bazasi bilan taqqoslanadi.

Natijalarning talqini va PCR reaktsiyasiga asoslangan xulosa haqida quyida o'qing.

Natijalarni dekodlash

Tadqiqotning yakuniy natijasi biologik material etkazib berilgandan keyin 1-2 kun o'tgach chiqariladi. Ko'pincha - tahlildan keyingi birinchi kunida.

Sifatli tahlil

• Salbiy natija tadqiqot uchun taqdim etilgan moddada yuqumli agentlarning izlari topilmaganligini anglatadi.
• Ijobiy natija biologik namunadagi patogen viruslar yoki bakteriyalarni topshirish vaqtida juda yuqori aniqlik bilan aniqlashni bildiradi.

Agar natija ijobiy bo'lsa, lekin infektsiyani faollashtirish belgilari bo'lmasa, tananing bu holati asemptomatik "sog'lom tashish" deb ataladi. Ko'pincha virusli kasalliklarda biomaterialni ma'lum joydan (bachadon bo'yni kanali, uretra, og'iz bo'shlig'i) olishda kuzatiladi. Bunday holatda davolanish shart emas, lekin doimiy tibbiy nazorat zarur, chunki bunday imkoniyat mavjud:

• virusning tashuvchilardan tarqalishi va sog'lom odamlarning infektsiyasi;
• jarayonning faollashishi va kasallikning surunkali shaklga o'tishi.

Ammo, agar qon testi ijobiy bo'lsa, bu infektsiya tanaga ta'sir qilganligini ko'rsatadi va bu endi tashuvchi davlat emas, balki darhol o'ziga xos terapiyani talab qiladigan patologiya.

Miqdoriy tahlil

Miqdoriy natija mutaxassis tomonidan ma'lum turdagi infektsiya uchun maxsus belgilanadi. Uning asosida kasallikning rivojlanish darajasini, bosqichini baholash mumkin, bu esa o'z vaqtida to'g'ri davolanishni tayinlash imkonini beradi.

o'rtacha xarajat

Polimeraza zanjiri reaktsiyasini o'tkazish uchun narxlar quyidagilar bilan belgilanadi: tadqiqot turi, patogenni aniqlashning murakkabligi, biologik materialni yig'ish qiyinligi, tahlil turi (sifat yoki miqdoriy), laboratoriyadagi narx darajasi.

Boshqa tomondan, PCRni o'rganishda bir turdagi materialni tahlil qilish uchun olishda bir vaqtning o'zida bir nechta patogenlarni aniqlash mumkin. Bu boshqa laboratoriya tekshiruvlarini tejaydi.

Taxminan, rublda PCR tahlilining narxi:

• gonokokklar, gardnerella, trichomonas vaginalis - 180 dan
• chlamydia trachomatis - 190 dan
• papillomavirus - 380 dan 500 gacha
• ayollarda urogenital traktning biotsenozi (mikroflorani miqdoriy va sifat jihatidan baholash) - 800 dan.

PCR tadqiqoti haqida ko'proq foydali ma'lumot olish uchun quyidagi videoga qarang:

PCR (polimeraza zanjiri reaktsiyasi) molekulyar biologiyaning yutug'i bo'lib, 20-asr oxiri va 21-asr boshlarida klinik laboratoriya diagnostikasining asosiy usullaridan biri bo'lib, tibbiyot fanining turli sohalarida katta foyda keltiradi.

Shunday qilib, inson tanasining millionlab hujayralari orasida tirik virusning o'zi yo'qolgan bo'lsa ham, uning DNK zarrasigina yo'qolgan bo'lsa ham, PCR, agar unga hech narsa xalaqit bermasa, ehtimol vazifani bajara oladi va hisobot beradi. ijobiy natija bilan "begona" ning qolishi. Bu PCRning mohiyati va uning asosiy afzalligi.

Afzalliklar va kamchiliklar

PCR diagnostikasini amalga oshiradigan laboratoriya jihozlar, test tizimlari va tibbiyot xodimlarining malakasi bo'yicha eng yuqori talablarga bo'ysunadi. Bu yuqori texnologiyali laboratoriya bo'lib, u juda sezgir va o'ziga xos reagentlar arsenaliga ega, shuning uchun u alohida kamchiliklarga ega emas. Agar u klinik ko'rinishlar bo'lmasa, ijobiy natija bermasa va shu bilan klinisyenni ikkilanish oldiga qo'ymasa: davolanishni boshlash kerakmi yoki yo'qmi?

Bemorni kuzatayotgan shifokor test natijalarining ishonchliligiga shubha qila boshlaydi, chunki u kasallikning hech qanday belgilarini ko'rmaydi. Ammo shunga qaramay, PCR tizimining yuqori sezuvchanligini hisobga olsak, u patogenni hatto preklinik bosqichda ham aniqlashini esga olish kerak va bu holatda ijobiy natija kamchilikdan ko'ra ko'proq afzallik hisoblanadi. Shunga asoslanib, davolovchi shifokor boshqa va qarshi dalillarni hisobga olgan holda terapiyaning maqsadga muvofiqligi to'g'risida qaror qabul qilishi kerak.

Polimeraza zanjiri reaktsiyasidan foydalangan holda diagnostikaning afzalliklari aniq:

• Yuqori o'ziga xoslik, tanlangan namunada ma'lum bir organizmga xos, ammo odamlarga begona nuklein kislota zarralari mavjudligi sababli 100% ga etadi;
• Yuqori ishlash, axir, PCR yuqori texnologiyali avtomatlashtirilgan texnika bo'lib, materialdan namuna olish kunida test o'tkazish va shu bilan bemorni keraksiz tashvishlardan xalos qilish imkoniyatini beradi;
• Bitta namunada ishlaydigan PCR bir nechta tadqiqotlarni o'tkazishga qodir bir nechta patogenlarni aniqlang agar uning bunday vazifasi bo'lsa. Masalan, PCR asosiy usullardan biri bo'lgan xlamidiya infektsiyasini tashxislashda xlamidiya bilan bir qatorda Neisseria (gonokokklar) ham aniqlanishi mumkin - patogen. Bundan tashqari, bu natijalarning ishonchliligiga salbiy ta'sir ko'rsatmaydi;
• PCR testi inkubatsiya davrida xavfli mikroorganizmlarni ko'rsatadi, ular hali tanaga jiddiy zarar etkazish uchun vaqtlari bo'lmaganida, ya'ni erta tashxis patologik jarayonning yaqinlashib kelayotgan rivojlanishi haqida ogohlantiradi, bu esa unga tayyorgarlik ko'rish va uni to'liq qurollantirish imkonini beradi.

Bundan tashqari, diagnostika paytida ba'zida yuzaga keladigan tushunmovchiliklarning oldini olish uchun PCR, agar kerak bo'lsa, ekspert maqsadlarida foydalanish uchun uning natijalarini (fotosurat, kompyuter) yozib olish mumkinligi bilan o'zini himoya qiladi.

PCR javoblaridagi norma salbiy natija hisoblanadi., begona nuklein kislotalarning bo'laklari yo'qligini ko'rsatadigan ijobiy javob tanada infektsiya mavjudligini ko'rsatadi, raqamli qiymatlar virusning holatini va sinov vaqtida uning kontsentratsiyasini ko'rsatadi. Biroq, tahlilning to'liq transkripti "PCR" mavzusida maxsus treningdan o'tgan shifokor tomonidan amalga oshiriladi. Natijalarni o'zingiz talqin qilishga urinish hech qanday ma'noga ega emas, chunki bu sodir bo'lishi mumkin, noto'g'ri tushunish va oldindan tashvishlanishni boshlash mumkin.

PCR nimadan "qo'rqadi", u nima qilishi mumkin va bunga qanday tayyorgarlik ko'rish kerak?

Boshqa har qanday tadqiqot kabi, ba'zida test natijalari noto'g'ri ijobiy yoki noto'g'ri salbiy bu erda PCR bundan mustasno emas. Bu quyidagi hollarda yuz berishi mumkin:

1. Reaksiya bosqichlaridan birida texnologik jarayonning buzilishi;
2. Materialni yig'ish, uni saqlash yoki tashish qoidalariga rioya qilmaslik;
3. Materialda begona aralashmalarning mavjudligi.

Bu shuni ko'rsatadiki, PCR - infektsiyalar tashxisiga ehtiyotkorlik bilan, ehtiyotkorlik bilan va to'g'ri yondashish kerak, aks holda material namunalari ularning tarkibiy tuzilishini o'zgartirishi yoki hatto qulashi mumkin.

PCR diagnostikasi bosqichlari. Noto'g'ri natijalar tadqiqotning har qanday bosqichida buzilishlarga olib kelishi mumkin

Infektsiyalarning PCR diagnostikasi boshqa laboratoriya usullari qatorida "oltin standartlar" toifasiga kiradi, shuning uchun u bir qarashda bir-biriga o'xshash bo'lmagan ko'plab kasalliklarning patogenlarini qidirish uchun ishlatilishi mumkin:

• Turli xil lokalizatsiya sil kasalligi, pnevmoniya (shu jumladan atipik, xlamidiya tufayli kelib chiqqan);
• Bolalik infektsiyalari (qizamiq qizilcha, parotit, qizamiq);
• difteriya;
• salmonellyoz;
• Zoonoz yuqumli kasallik - listerioz (kasallik limfa tugunlari, markaziy asab tizimi, ichki organlarning shikastlanishi bilan turli alomatlar bilan tavsiflanadi);
• Epstein-Barr virusining kirib borishi natijasida kelib chiqqan kasalliklar (yuqumli mononuklyoz va boshqalar);
• Papillomavirus infektsiyasi (HPV va uning turlari) tomonidan qo'zg'atilgan onkologik patologiya;
• Borrelioz (Lyme kasalligi, Shomil ensefaliti);
• Helicobacter pylori infektsiyasi, uning qo'zg'atuvchisi inson oshqozonida yashovchi Helicobacter pylori bakteriyasi. Helicobacter oshqozon yoki o'n ikki barmoqli ichak saratoni rivojlanishiga sabab bo'lishi isbotlangan;
• va deyarli hamma narsa.

Jinsiy yo'l bilan yuqadigan infektsiyalarning PCR diagnostikasi alohida ahamiyatga ega, chunki bu tarzda kelib chiqqan kasalliklar ko'pincha uzoq vaqt davomida hech qanday klinik ko'rinishsiz davom etadi, ammo homiladorlik paytida ular faollasha boshlaydi va shu bilan bolaning sog'lig'i va hatto hayotiga tahdid soladi. . Va xuddi shunday yo'l tuting. Ulardan ba'zilari ("mash'al") bir vaqtning o'zida STI bilan bog'liq, shuning uchun ikkinchisi batafsilroq ko'rib chiqishni talab qiladi. O'quvchi maqolaning keyingi bo'limlarida eng mashhur usullar bilan tanishish imkoniyatiga ega bo'ladi.

Ishonchli natijaga erishish uchun qanday qilib to'g'ri tayyorgarlik ko'rish kerak?

Biz darhol ta'kidlaymizki, PCR ga tayyorgarlik juda oddiy, bemordan alohida harakatlarni talab qilmaydi. Siz uchta oddiy vazifani bajarishingiz kerak:

1. Sinovdan 24 soat oldin jinsiy aloqada bo'lmang;
2. Tomirdan qon olish va tahlil qilish uchun siz och qoringa kelishingiz kerak, aytmoqchi, siz ham ichishingiz mumkin emas;
3. Siydikni kechasi (ertalab - dorixonada bir kun oldin sotib olingan steril idishda) o'tkazish kerak.

PCR har qanday biologik muhitda ishlashi mumkin

PCR usuli "qonga chanqoq" emas, shuning uchun u shubhali yuqumli agent bo'lgan har qanday biologik muhitni qabul qiladi. tanlov - tadqiqot uchun nima kerak, shifokor bilan qoladi.

Shunday qilib, patogenni izlashda, qon testidan tashqari (garchi u ham mos keladi va ko'p hollarda boshqa materiallar bilan parallel ravishda olinadi), siz quyidagilarni qo'llashingiz mumkin:

• (urogenital traktining oqishi);
• Og'iz bo'shlig'i, kon'yunktiva, nazofarenks, jinsiy yo'llarning shilliq pardalarini qirib tashlash (ayollarda ular bachadon bo'yni va qindan, erkaklarda - siydik yo'lidan olinadi);
• tupurik;
• sperma;
• prostata sharbati;
• Plasenta to'qimalari va amniotik suyuqlik (amniotik suyuqlik);
• Siydik cho'kmasi (tsentrifugalashdan keyin), masalan, ba'zi STI va Mycobacterium tuberculosis aniqlash uchun;
• Xuddi shu maqsadda balg'am va plevra suyuqligi;
• ekssudatlar;
• Markaziy asab tizimining yuqumli lezyoniga shubha qilingan taqdirda miya omurilik suyuqligi;
• Jigar, o'n ikki barmoqli ichak, oshqozon va boshqalardan olingan biopsiya materiali (biopsiya).

Yuqoridagilarga shuni qo'shimcha qilmoqchimanki, barcha holatlarda, hatto qirib tashlash va sekretsiyalarda ham, sinov uchun etarli material bo'ladi, chunki PCR testi katta hajmlarni talab qilmaydi, tahlil qilish uchun odatda bir necha mikrolitr etarli bo'ladi. Eppendorf tipidagi mikrotuba va o'rganishga yuborildi.

Kasalliklar va PCR dan foydalanish

OIV va polimeraza zanjiri reaktsiyasi

Odatda, immunoblottingning ijobiy natijalari bo'lsa, anonim tekshiruvdan o'tishda tashxis yana takrorlanadi. Agar tashxis tasdiqlansa, bemorga qo'shimcha tadqiqotlar buyuriladi:

1. Immunologik reaktsiyalar yordamida CD 4 limfotsitlar sonining mutlaq qiymatlarini aniqlash (immunokompetent hujayralar - T-yordamchilar yoki yordamchilar), ular birinchi navbatda infektsiyani yuqtiradilar, shundan so'ng ular o'zlarining asosiy xususiyatlarini yo'qotadilar va farqlay olmaydilar. o'ziga tegishli" va boshqa birovning. Ular organizmning normal hujayralari uchun qon plazmasida aylanib yuruvchi virusning RNKsini oladi va ularga reaksiyaga kirishmaydi;
2. Virusli RNKni PCR yordamida aniqlash va patologik jarayonning bosqichini, og'irligini va ushbu ma'lumotlarga asoslangan prognozni aniqlash uchun virus zarralari kontsentratsiyasini hisoblash.. Albatta, bu borada "norma" so'zi mavjud emas, chunki reaktsiya har doim ijobiy bo'ladi va raqamli qiymatlarni dekodlash shifokorning vakolatiga kiradi.

PCR va gepatit

PCR usuli patogenlarni aniqlashi mumkin, ko'pincha test boshqa usullar bilan yomon aniqlangan gepatit C ni tashxislash uchun ishlatiladi.

Gepatit C virusi (RNK o'z ichiga olgan) inson tanasida OIVga o'xshaydi. Jigar hujayralari (gepatotsitlar) genomiga kirib, u kamida 2 yildan keyin, kamida 20 yildan keyin kelishi mumkin bo'lgan qanotlarda kutib turadi, shuning uchun shifokorlar uni "yumshoq qotil" deb atashdi. Gepatit C jigar parenximasida malign jarayonning shakllanishiga olib keladi, bu keyingi bosqichlarda o'zini namoyon qiladi. Immunitet tizimi virusni gepatotsit deb adashib, bu hodisalarning barchasini sezmaydi. To'g'ri, virusga antikorlar ma'lum miqdorda ishlab chiqariladi, ammo ular munosib immunitetni ta'minlamaydi. Gepatit C diagnostikasi uchun ELISA unchalik ma'lumotga ega emas, chunki bu virus iz qoldirganligini ko'rsatadi va u o'zini tashlab ketganmi yoki yo'qmi noma'lum. HCV bilan o'z-o'zini davolash holatlari ma'lum, virusga qarshi antikorlar saqlanib qoladi va hayot davomida aylanishda davom etadi (immunologik xotira). PCR antikorlarning shakllanishidan sezilarli darajada oldinda va virusli zarrachani 1-1,5 hafta ichida aniqlashi mumkin, antikorlar esa 2 oydan olti oygacha bo'lgan davrda paydo bo'lishi mumkin.

Inson tanasida keng tarqalgan gepatit C virusiga shubha qilingan taqdirda PCR diagnostikasi tadqiqotning eng maqbul usuli hisoblanadi, chunki faqat u bemorning qonida yoki jigar biopsiyasida "yumshoq dushman" mavjudligini aniqlashga qodir.

Biroq, ba'zida AT ijobiy, PCR natijasi esa salbiy bo'lgan holatlar mavjud. Bu ba'zida virus miqdori juda kam bo'lsa yoki qon oqimiga kirmasdan jigarda uxlab qolganda sodir bo'ladi. Hali ham haqiqatni topish uchun bemor qayta tahlil qilinadi yoki hatto bir nechta.

Papillomavirus infektsiyasi

Agar o'z-o'zini davolash sodir bo'lmasa, u o'zini ko'rsatmasdan, uzoq vaqt davomida mezbonning tanasida saqlanib qolishi mumkin, bu hatto undan shubhalanmaydi, chunki PCR o'tkazilmagan va kasallikning alomatlari yo'q. Biroq, papillomavirus infektsiyasining mavjudligi, yashirin bo'lsa-da, inson salomatligiga befarq bo'lishdan uzoqdir, bu erda onkologik kasalliklarni keltirib chiqaradigan virusning ayrim turlari alohida xavf tug'diradi (16, 18-turlar).

Ko'pincha aholining yarmi HPV bilan kasallanadi, chunki virus ayol jinsiy a'zolarini va ayniqsa bachadon bo'yni ko'proq sevadi, bu erda viruslarning ayrim turlari displastik jarayonlarning rivojlanishiga hissa qo'shadi, keyin esa bachadon bo'yni saratoni, agar displazi bo'lmasa. davolanadi va virus chiqariladi. Shunday qilib, polimeraza zanjiri reaktsiyasi virusli DNKni aniqlaydi va keyin ayolning tanasida joylashgan "yomon" yoki "yaxshi" (onkogen yoki onkogen bo'lmagan) turini ko'rsatadi.

Boshqa STI va TORCH infektsiyalari

Shubhasiz, polimeraza zanjiri reaktsiyasi nuklein kislotalardan tashkil topgan har qanday begona tuzilmani topishi mumkin, shuning uchun bu test barcha STD va TORCH infektsiyalarini aniqlash uchun javob beradi, ammo u har doim ham qo'llanilmaydi. Aytaylik, arzonroq va arzonroq bo'lsa, nega gonokokkni aniqlash yoki aniqlash uchun bunday qimmat tadqiqotlar o'tkazish kerak?

TORCH infektsiyalari va STIlar bir-biri bilan shunchalik bog'liqki, ba'zida ma'lum bir patogen qaysi guruhga berilishi kerakligini aniqlash qiyin. Umuman olganda, ularni tushunish qiyin bo'lishi mumkin, chunki bu har doim jinsiy yo'l bilan yuqadigan yoki faqat ma'lum sharoitlarda (immunitet tanqisligi) bo'lishi mumkin bo'lgan juda xilma-xil mikroorganizmlar guruhlari va faqat homiladorlik paytida qiziqish uyg'otishi mumkin, chunki bu organizmga salbiy ta'sir ko'rsatishi mumkin. uning kursi va homila ustida.

PCR yashirin infektsiyalarni aniqlashning asosiy usuli hisoblanadi

Klinik ko'rinishlarning rivojlanishi turli patogenlarga asoslangan bo'lib, ularni faqat PCR orqali topish mumkin, bu uning asosiy vazifasi, ba'zan Elishay bilan birga, ba'zan esa. yagona tasdiqlovchi test sifatida, ayniqsa kasallikning alomatlari bo'lmasa. Bunday qiyin vaziyatni polimikrobiyal infektsiya yaratishi mumkin, bu aniq patogenlardan tashqari, opportunistik patogenlarni ham o'z ichiga oladi.

Ureaplazma ko'pincha mikoplazma bilan tandemda uchraydi. Va bu tasodif emas. Bu turlar, xlamidiya kabi, viruslar ham, bakteriyalar ham emas, ular hujayralar ichida yashaydi va STIlarga tegishlidir, garchi ularning sog'lom tanada mavjudligi ham kamdan-kam uchraydi. Shunday qilib, sog'lom tashuvchini kasal odamdan ajratish uchun maxsus usullar kerak bo'ladi, bu erda PCR eng ishonchli hisoblanadi, chunki ushbu mikroorganizmlarning tuzilishi va xatti-harakatlarining o'ziga xos xususiyatlari tufayli boshqa tadqiqotlar samarasizdir.

(1, 2-toifa) va gerpes viruslariga (5-toifa) kelsak, bu erda ham vaziyat noaniq. Dunyo aholisining infektsiya darajasi 100% ga yaqinlashmoqda, shuning uchun bu holda virusni va uning dozasini aniqlash juda muhimdir, bu homiladorlik davrida ayniqsa muhimdir, chunki kattalar uchun virus uning tanasida ildiz otgan. tana ko'pincha hech qanday muammo tug'dirmaydi va kasallik belgilarini bermaydi.

Shuning uchun shifokor tomonidan tayinlangan bunday tekshiruvni e'tiborsiz qoldirmaslik kerak, chunki ba'zi hollarda polimeraza zanjiri reaktsiyasi nafaqat ayolni, balki kichik, tug'ilmagan erkakni ham jiddiy asoratlardan himoya qila oladigan laboratoriya diagnostikasining majburiy va zarur usuli hisoblanadi.

Xulosa qilib shuni ta'kidlashni istardimki, PCR kabi ajoyib usul insoniyatga 30 yildan ortiq vaqt davomida xizmat qilmoqda. Shu bilan birga, testning vazifalari yuqumli kasalliklarning patogenlarini qidirish bilan cheklanmaydi. Molekulyar biologiya tuprog'ida tug'ilgan polimeraza zanjiri reaktsiyasi genetika bilan uzviy bog'liqdir. shaxsni aniqlash uchun sud tibbiyotida muvaffaqiyatli qo'llaniladi, sud tibbiyotida otalikni belgilash, veterinariya tibbiyotida, agar hayvonot klinikasi qimmatbaho asbob-uskunalar sotib olish imkoniyatiga ega bo'lsa, shuningdek, boshqa sohalarda (sanoat, qishloq xo'jaligi va boshqalar).

Video: PCR - mohiyati va qo'llanilishi

PCR tahlili, bu nima ekanligini ko'pchilik bilmaydi, garchi bugungi kunda bu yuqumli kasalliklarni tashxislashning innovatsion usullaridan biri bo'lib, uning ishlab chiqaruvchisi 1993 yilda Nobel mukofotiga sazovor bo'lgan. Ushbu yuqori texnologiyali usul sizga jiddiy kasalliklarni erta bosqichda aniqlash va ularni o'z vaqtida davolashni boshlash imkonini beradi.

Tahlil molekulyar biologiya tamoyillariga asoslanadi. PCR tadqiqoti harorat sharoitlari ta'sirida to'plangan biomaterialda mavjud bo'lgan bakteriya va viruslarning RNK va DNKsini nusxalaydigan maxsus fermentdan foydalanishdan iborat. Bunday ommaviy ko'payish shifokorga kasallikni qo'zg'atgan bakteriya qaysi turga tegishli ekanligini aniq aniqlashga, shuningdek biomaterialda uning kontsentratsiyasi darajasini o'lchashga imkon beradi. Nusxa ko'chirish jarayoni maxsus apparatda - kuchaytirgichda amalga oshiriladi, u to'plangan material bilan probirkalarni isitadi va sovutadi, takrorlash uchun qulay sharoitlar yaratadi.

PCR tadqiqoti ko'plab sabablarga ko'ra amalga oshiriladi, lekin ko'pincha u yuqumli kasalliklarning mavjudligini aniqlash uchun ishlatiladi, masalan:

• gerpes;
• genital infektsiyalar - xlamidiya, ureaplazmoz, bakterial vaginoz, trichomoniasis;
• kandidoz;
• gepatit;
• mononuklyoz;
• listerioz;
• sitomegalovirus;
• sil kasalligi;
• inson papillomavirusi;
• Shomil orqali yuqadigan ensefalit.

PCR tahlili tibbiyot sohasi bilan chegaralanib qolmaydi, agar jinoyat joyida topilgan biologik material kimga tegishli ekanligini tushunish zarur bo'lsa, skrining ko'pincha amalga oshiriladi, ya'ni PCR tahlili sud tibbiyotida keng qo'llaniladi. Shuni ta'kidlash kerakki, agar otalik zarur bo'lsa, PCR uchun smear yoki qon olinadi. PCR diagnostikasi natijalari hech qanday tarzda DNK qarindoshligi uchun odatiy tahlildan kam emas va bu ancha arzon.

Diagnostikaning xususiyatlari

PCR tahlili juda ko'p ijobiy tomonlarga ega. Avvalo, testning sezgirligini ta'kidlash kerak. PCR analizatori bakteriyalarning DNK molekulalarini ular soni kam bo'lsa ham aniqlashga qodir, ya'ni shifokor kasallikning dastlabki bosqichi yoki kasallikning surunkali shaklining boshlanishi haqida ma'lumot oladi. PCR qon testi hatto yashirin shaklda bo'lgan va o'zini o'zi bermaydigan yuqumli kasallikning mavjudligini aniqlashi mumkin.

Shuni ta'kidlash kerakki, erkaklar va ayollarda PCR tahlili har qanday turdagi materiallar mavjudligida amalga oshirilishi mumkin, u qon yoki smear, tupurik, teri hujayralari va hatto siydik bo'lishi shart emas.

PCR tahlillari natijalari keng bo'lishi mumkin, chunki infektsiyalarning PCR diagnostikasi bir vaqtning o'zida bitta biomaterial namunasida joylashgan bir nechta patogenlarni ushlashi mumkin. Tekshiruv har qanday qulay vaqtda amalga oshirilishi mumkin, tahlil shuni ko'rsatadiki, odam qisqa vaqt ichida bilib oladi, chunki biomaterial diagnostikasi natijalari 5 soat ichida tayyor bo'ladi.

Barcha shifokorlar, agar diagnostika metodologiyasi to'g'ri bajarilgan bo'lsa, PCR yoki boshqa materiallar uchun qon tekshiruvi hech qachon noto'g'ri natijalar bermasligiga rozi. PCR musbat yoki salbiy PCR faqat laboratoriya xodimlarining professionalligi yuqori bo'lmagan taqdirda yolg'on bo'lishi mumkin. Agar olib tashlangan biomaterial ifloslangan yoki noto'g'ri saqlangan bo'lsa, PCR tahlilining dekodlanishi natijalarni buzishi mumkin.

Diagnostikaga tayyorgarlik

Ayollarda PCR smear, agar jinsiy yo'l bilan yuqadigan kasalliklarni, masalan, xlamidiya, ureaplazma yoki herpesni aniqlash zarur bo'lsa, bachadon bo'ynidan olinadi. Agar erkak tomonidan ushbu bakteriyalarga PCR o'tkazilishi kerak bo'lsa, u holda undan siydik yo'lidan oqindi olinadi - prostata sharbati, boshqacha qilib aytganda. Agar gepatit, toksoplazmoz va OIV infektsiyasini aniqlamoqchi bo'lsa, qon PCR bilan tekshiriladi. Tomoqdagi tamponni olib tashlash orqali mononuklyoz va sitomegalovirus uchun PCR tahlili o'tkaziladi. O'pka infektsiyalari mavjudligi uchun polimeraza zanjiri reaktsiyasi balg'am yoki plevral suyuqlik kabi biomaterial mavjudligi bilan amalga oshiriladi.

Homiladorlik davrida PCR intrauterin infektsiyalarga, shuningdek, homila asab tizimining kasalliklari va patologiyalariga shubha bo'lsa, amalga oshiriladi. Tadqiqot uchun biomaterial sifatida platsenta to'qimasi homilador to'qimalardan olinadi. Agar odamda asab tizimining shikastlanishi bo'lsa, miya omurilik suyuqligi tekshiriladi. Helicobacter pylori kabi bakteriyani aniqlash uchun oshqozon va o'n ikki barmoqli ichakning biopsiyalari qo'llaniladi.

Siydikni tahlil qilish PCR ham tez-tez qo'llaniladi, ammo qon testidan ko'ra kamroq afzallik beriladi. Bu yuqumli kasalliklarni qo'zg'atadigan patogen mikroorganizmlarning mavjudligini ko'rish imkonini beradi, ammo ularning aniq sonini va kasallikning rivojlanish darajasini ko'rsata olmaydi. Agar biron sababga ko'ra qonni olish yoki smear qilish mumkin bo'lmasa, siydik PCR qo'llaniladi. Shuni ham ta'kidlash kerakki, siydik PCR kichik bolalarda infektsiyalarni tekshirish uchun ishlatilishi mumkin. Siydikni tahlil qilish, shuningdek, siydik pufagida infektsiya va yallig'lanish mavjudligini aniqlash, toshlar, qum, shuningdek, sistit va uretritni aniqlash imkonini beradi.

Yuqorida aytib o'tilganidek, siz har qanday biomaterial mavjudligida PCR uchun tahlil qilishingiz mumkin. PCR tahlili, bu nima, bilasizmi, tashxisga qanday tayyorgarlik ko'rishni ham bilishingiz kerak. Tayyorgarlik to'g'ridan-to'g'ri olib tashlanishi kerak bo'lgan narsaga bog'liq, masalan, ertalab jinsiy a'zolarni to'liq gigienadan so'ng siydik chiqarishingiz kerak. Qon och qoringa, donorlik paytida, aniqrog'i, bir kun oldin, har qanday dori-darmonlarni qo'llashdan voz kechish kerak. Surunkali kasalliklar mavjud bo'lsa, foydalanish uchun tasdiqlangan dorilar ro'yxati davolovchi shifokor tomonidan individual ravishda hal qilinadi.

Najasni tahlil qilish ehtiyotkorlik bilan tayyorgarlikdan so'ng ertalab olinadi. Tug'ilish arafasida og'ir ovqatdan bosh tortish va genital organlarning gigienasini yaxshilab o'tkazish kerak. Agar biomaterial klizma bilan olib tashlangan bo'lsa, najasni tahlil qilish ishonchsiz bo'ladi, materialning tabiiy tushishi kerak. Tuprikni etkazib berishga tayyorgarlik talab qilinmaydi, chekishni to'xtatish, tsitrus sharbatini ichish kifoya.

Jinsiy aloqa paytida yuqadigan kasalliklarni aniqlash uchun biomaterialni topshirishdan oldin, bemorlar PCR tashxisidan ikki kun oldin jinsiy aloqani istisno qilishlari kerak. Ayollarga hayzdan keyin ikki kun o'tgach, tanqidiy kunlarda bachadon bo'yni smearini olish taqiqlanadi, aks holda PCR dekodlash buzilgan ma'lumotlarga ega bo'ladi.

Skrining natijalari

Bunday PCR tahlili ma'lum bir bemorning ahvoli haqida nima deyishini faqat malakali shifokor batafsil tushuntira oladi, shaklda ko'rsatilgan ma'lumotlarni mustaqil ravishda tushunish oson bo'lmaydi. Agar siz shifokordan ma'lumotlarni shifrlashni so'rasangiz, u birinchi navbatda natija ijobiy yoki salbiy ekanligini aytadi. Agar tahlil salbiy bo'lsa, demak, odam sog'lom va test materialida hech qanday bakteriya topilmagan. Ijobiy natija bo'lsa, patogenning aniq turi va uning miqdori ko'rsatilgan, shuningdek, ma'lum immunoglobulinlar mavjudligi bilan infektsiyaning aniq davrini bilib olishingiz mumkin.

Bemorning ahvolini aniq aks ettira oladigan immunoglobulinlarning bir necha sinflari mavjud:

1. IgG 4 haftalik infektsiyadan keyin qonda rivojlanadi va qonda bir necha yilgacha davom etishi mumkin. Ular har doim ham bakteriyalarning ko'rsatkichlari emas, ba'zida ular xuddi shunday turdagi patogen bilan duch kelgan tananing xotirasi sifatida ishlaydi.
2. IgM - infektsiyadan keyin eng boshida paydo bo'ladi. Qoida tariqasida, ular allaqachon 5-kuni ko'rinadi, bu bakteriyaga hujum qiladigan tananing birinchi himoyachilari. Ular ikki haftadan so'ng qon natijasidan yo'qoladi. Agar ular qon testida mavjud bo'lsa, unda infektsiya yaqinda, taxminan bir hafta oldin sodir bo'lgan deb taxmin qilish mumkin.
3. IgA organizmdagi bakterial infektsiyaning o'tkir rivojlanishi yoki surunkali kasallikning takroriy bosqichi haqida signal beradi.

Tahlil ijobiy natija ko'rsatadigan bir qator holatlar mavjud, ammo odam o'zini umuman yomon his qilmaydi. Bu umuman tashxis qo'yishdagi xatoni ko'rsatmaydi, aksincha, kasallikning surunkali shakli mavjud bo'lib, u uyqu holatidadir yoki kasallikning rivojlanishi endigina boshlanadi. Ayni paytda simptomlarni qo'zg'atadigan bakteriyalar etarli emas.

Endi siz tahlil qilish tamoyilini bilasiz va agar yuqumli kasallikning eng kam shubhasi bo'lsa, ushbu tashxis uchun murojaat qilishingiz mumkin. Keyingi davolanishning davomiyligi va uning samaradorligi to'g'ridan-to'g'ri tashxisni qanchalik tez o'tkazishingizga bog'liq, bu amalda og'riqsizdir. Sog'lig'ingizni doimo yaxshi darajada ushlab turish uchun yiliga bir marta STD, shuningdek boshqa organlarning infektsiyalari mavjudligi uchun profilaktik PCR diagnostikasidan o'tish tavsiya etiladi. Keyinchalik uning oqibatlarini bartaraf etishdan ko'ra, kasallikning oldini olish yaxshiroqdir.

Ko'pgina hollarda bemorlar kasallikni tekshirish yoki aniqlash uchun PCR diagnostikasi talab qilinadigan vaziyatga duch kelishlari kerak. Bu nima ekanligini va nima uchun kerakligini tushunish muhimdir.

Polimeraza zanjiri reaktsiyasi (PCR) usuli rivojlanishning dastlabki bosqichlarida ko'plab kasalliklarni aniqlashga yordam beradigan tadqiqotdir. Uning mohiyati organizmda mavjud bo'lgan patogenning DNK yoki RNKsini topishda yotadi. PCR boshqa turdagi tadqiqotlar samarasiz bo'lgan hollarda patogenni aniqlash imkonini beradi.

Ushbu usulning mashhurligi uning soddaligi va foydalanish kengligidadir. U turli kasalliklarni tashxislash uchun klinisyenlar tomonidan qo'llaniladi. Tez murakkab miqdoriy va genomik tadqiqotlar o'tkazish imkonini beradi.

Klassik PCR usulining eng muhim tibbiy qo'llanilishidan biri patologik sharoitlarni keltirib chiqarishi mumkin bo'lgan mikroorganizmlarni aniqlashdir.

PCR tahlilining mohiyati

PCR diagnostikasi (molekulyar biologiya bilan izohlanadi) - bu har qanday genetik materialni o'z ichiga olgan namunalarda minimal miqdorda mavjud bo'lgan DNKning qisqa ketma-ketligini tahlil qilish uchun ishlatiladigan molekulyar klonlash usuli. Ushbu usul ko'pincha "DNK nusxa ko'chirish mashinasi" deb ataladi.

PCR diagnostikasi in vitro (tanadan tashqarida) laboratoriyada amalga oshiriladi va DNKning bo'linishidan oldingi tabiiy duplikatsiya jarayoniga asoslanadi. Namunada virus, bakteriya yoki boshqa mikroorganizmni aniqlash imkoniyatidan tashqari, PCR ularning sonini aniqlash imkonini beradi.

Gepatit C yoki inson immunitet tanqisligi virusi (OIV) infektsiyasi kabi kasalliklarda virusli yuk kasallikning qaerdaligini va terapiya qanchalik samarali ekanligini ko'rsatadigan yaxshi ko'rsatkichdir.

Ushbu ma'lumotlar bilan qurollangan shifokorlar davolanishni qachon boshlash kerakligini aniqlashlari va jarayonni nazorat qilishlari mumkin. Bu har bir bemor uchun individual yondashuvni yaratishga imkon beradi.

PCR diagnostikasi uch bosqichni o'z ichiga oladi, ularning har birida maqsadli DNK miqdori sezilarli darajada oshadi. Bunday reaktsiya natijasida asl yoki "maqsadli" DNKning bir milliarddan ortiq nusxalari olinadi, bu esa tanadagi virus mavjudligini baholash imkonini beradi. Bu PCR usulining asosiy xususiyatidir.

Usulning afzalliklari va kamchiliklari

PCR diagnostikasi (bu nima, yuqorida tavsiflangan) 1983 yilda Keri Mullis tomonidan batafsil tavsiflangan. O'shandan beri bu usul laboratoriya amaliyotida juda mashhur.

Ushbu turdagi tadqiqotning asosiy afzalliklari:

• universallik;
• natijalar tezligi;
• ishonchli natijalarni olishning yuqori ehtimoli;
• o'ziga xoslik;
• aniqlash mumkin bo'lgan turli xil kasalliklar.

PCR usulining universalligi insonning har qanday fiziologik materiallaridan foydalanish imkoniyatidadir. Tahlil qilish uchun hatto bitta soch etarli.

Avtomatlashtirish tufayli ma'lumotlarni qayta ishlash jarayoni bir necha soat davom etishi mumkin. O'ziga xoslik ma'lum bir patogenga xos bo'lgan o'ziga xos DNK fragmentini ajratib olishdan iborat. PCR tahlili yordamida ko'plab kasalliklarni o'tkir bosqichda ham, yashirin bosqichda ham aniqlash mumkin.

Ammo, juda ko'p afzalliklarga qaramay, PCR diagnostikasi usuli ham kamchiliklarga ega:

• noto'g'ri ijobiy natijalar ehtimoli;
• yuqori sezuvchanlik;
• mikroorganizmlarning o'zgaruvchanligi.

Usulning asosiy kamchiliklari PCR ning tirik mikroorganizmlarni o'liklardan ajrata olmasligidir.. Qoida tariqasida, bu davolanishning muvaffaqiyati baholanishi kerak bo'lgan vaziyatga ishora qiladi. Bunday holatda, agar kasallik davolangan bo'lsa, u holda o'lik hujayralar inson tanasida bir muncha vaqt qoladi va uni butunlay yangilash uchun 4 dan 6 haftagacha bir oz vaqt kerak bo'ladi.

Yuqori sezuvchanlik - bu afzallik va ayni paytda kamchilik. Ba'zi mikroorganizmlar organizmda oz miqdorda mavjud. Shuning uchun, bu holda, ushbu diagnostika usuli informatsion emas va boshqa turdagi tadqiqotlardan foydalanish tavsiya etiladi.

Har qanday mikroorganizm mutatsiyaga uchrashi mumkin. Va kuchaytirish jarayoni o'zgarishlarga eng kam sezgir bo'lgan ma'lum bir qismdan foydalansa ham, u mutatsiyalarni olishi va sinov tizimiga ko'rinmas holga kelishi mumkin. Bu holat laboratoriya tahlillarining turli tizimlari butunlay boshqacha natijalarni ko'rsatishi mumkinligini tushuntiradi.

Usul qaysi sohalarda qo'llaniladi?

PCR tadqiqoti turli kasalliklarni aniqlash uchun klinik amaliyotda qo'llanilishi mumkin. U ginekologiya, urologiya, gastroenterologiya, onkologiya va boshqalarda keng qo'llaniladi. Bundan tashqari, u shaxs va otalikni aniqlash uchun sud-tibbiyot fanida samarali qo'llaniladi.

Ushbu turdagi tadqiqot rejalashtirish bosqichida va homiladorlik davrida qo'llaniladi. TORCH infektsiyasini tahlil qilish ayolning tanasida infektsiyaning mavjudligini aniqlash uchun amalga oshiriladi. Infektsiyalardan biri sabab bo'lgan kasalliklar ayol uchun engil bo'lishi mumkin, ammo homilaning o'limiga qadar jiddiy tug'ma nuqsonlarni keltirib chiqaradi.

Shuningdek, PCR diagnostikasi usuli kelajakda ma'lum kasalliklarning rivojlanishiga insonning genetik moyilligini aniqlashga yordam beradi.

PCR diagnostikasi orqali qanday infektsiyalar aniqlanadi

PCR usuli viruslar, bakteriyalar va zamburug'larni aniqlashga yordam beradi.

U bilan aniqlanishi mumkin bo'lgan eng keng tarqalgan kasalliklar:

Qanday biologik materiallar o'rganilmoqda

Kasallik, simptomlar va tadqiqotning maqsadlarini hisobga olgan holda, PCR diagnostikasi har qanday fiziologik suyuqlik yoki to'qima bo'lagidan foydalanishi mumkin.

Bo'lishi mumkin:

• qon;
• tupurik;
• balg'am;
• siydik;
• ajralish;
• orofarenkdan smear;
• ta'sirlangan to'qimalarning bir qismi;
• sinovial suyuqlik;
• ayollarda vaginadan yoki erkaklarda siydik yo'lidan qirib tashlash;
• eyakulyatsiya;
• sochlar va boshqalar.

Genitouriya tizimining kasalliklari uchun siydik olinadi, ayollarda vaginadan yoki erkaklarda siydik yo'lidan surtma olinadi. OIV, turli turdagi gepatit, TORCH infektsiyalari kabi kasalliklarni aniqlash uchun venoz qon beriladi.

Onkologiyani istisno qilish yoki tasdiqlash uchun jarrohlik aralashuvlar paytida biopsiya uchun to'qimalarning bo'laklari chiqariladi.

Tahlil qilishga qanday tayyorgarlik ko'rish kerak

Tadqiqotga tayyorgarlik ko'rish xususiyatlari taqdim etilgan biomaterialga bog'liq. Shuni ham unutmaslik kerakki, antibiotiklar va boshqa dori vositalaridan foydalanishni istisno qilish kerak. Davolashning samaradorligini kuzatish uchun siz kamida 4 hafta davomida dori-darmonlarni qabul qilganingizdan keyin intervalni saqlashingiz kerak.

Ertalab och qoringa qon beriladi. Siydik va najas buning uchun mo'ljallangan mutlaqo steril idishga joylashtirilishi kerak. Shu bilan birga, siydik to'plashdan oldin, tashqi jinsiy a'zolarning gigienasini amalga oshirish kerak.

Agar smear berilgan bo'lsa, sizga kerak:

• 3 soat davomida siydik chiqarmang;
• bir kun oldin yuvish va yuvish tavsiya etilmaydi (ayollar uchun);
• jinsiy faoliyatni to'xtatish uchun kun;
• ayollar tsiklning o'rtasida smear olishlari kerak.

PCR tadqiqotining bosqichlari

PCRni boshlashdan oldin DNK namunadan ajratilishi kerak. DNK izolyatsiyasi qo'lda yoki asbob yordamida amalga oshirilishi mumkin bo'lgan ko'p bosqichli jarayondir.

Namuna tayyorlangach, uch bosqichli PCR jarayoni boshlanadi:

• maqsadli DNKni ajratish (denaturatsiya);
• DNK fragmentlarini kuchaytirish (ko'paytirish);
• kuchaytirilgan DNK bo'laklarini aniqlash (identifikatsiya qilish).

PCRning birinchi bosqichi denaturatsiya deb ataladi. Uning mohiyati shundan iboratki, DNK namunalari bo'lgan probirka yuqori haroratga (taxminan 90 daraja) qizdiriladi. Yuqori haroratlar tufayli molekula kodini tashkil etuvchi nukleotidlar orasidagi zaif bog'lanishlar yo'q qilinadi. Natijada, ikki zanjirli DNK yoki RNK ikkita alohida zanjirga bo'linadi.

Tadqiqotning "tozaligi" uchun o'rganilayotgan biomaterialga organik moddalarni erituvchi maxsus eritma qo'shiladi. Ushbu bosqichning davomiyligi sinov materialining turiga va yuqumli agentga bog'liq.

PCR diagnostikasi (yuqorida tavsiflangan narsa) ikkinchi bosqichda DNK parchalarini infektsiyaning DNKiga asoslangan holda ko'paytiradi. PCR namunadagi barcha nuklein kislotalarni nusxa ko'chirmaydi. U faqat genetik kodning maxsus ketma-ketligini, qisqa fragmentni (primer) nusxa ko'chiradi.

Ikkinchi bosqichda quvur sovutiladi. Butun PCR jarayoni termostat yoki tsikl deb ataladigan mashina tomonidan avtomatlashtirilgan va bir necha soat ichida bajarilishi mumkin. PCR mashinasi har bir necha daqiqada reaktsiya aralashmasining haroratini o'zgartirish uchun dasturlashtirilgan. Bu qisqa bo'laklar bitta simli shablonga bog'lanishi uchun sodir bo'ladi.

Amplifikatsiya 30-40 tsiklda sodir bo'ladi. Bu davrda laboratoriya yordamchisi DNK fragmentini ko'chiradi va uning miqdorini zanjirli reaktsiya bilan oshiradi. Shunday qilib, har bir tsikl bilan nusxalar soni bir necha million yoki hatto milliardlab ko'payadi.

Tadqiqotning uchinchi bosqichida viruslar va bakteriyalarning DNKsi mavjudligi aniqlanadi. Bu hosil bo'lgan aralashmani taqsimlash va unga maxsus eritma qo'shish orqali amalga oshiriladi. Bu suyuqlik ultrabinafsha nurlar ta'sirida DNK parchalarini ma'lum bir rangga ega bo'lishiga imkon beradi. Bu inson tanasida patogen mikroblar mavjudligining ko'rsatkichidir.

Homiladorlik davrida PCR

PCR diagnostikasi (bu nima, yuqorida tavsiflangan) homiladorlik paytida birinchi marta belgilanishi mumkin, chunki bu majburiy protsedura. Bu usul yashirin infektsiyalarni va homilada malformatsiyalar tahdidini aniqlashga yordam beradi.

Tahlil qilish uchun:

Xomilaning rivojlanishiga salbiy ta'sir ko'rsatadigan, nuqsonlarni keltirib chiqaradigan, erta tug'ilish va tushishni keltirib chiqaradigan yuqumli tabiatning kasalliklari mavjud. Ular homiladorlikning birinchi trimestrida ayniqsa xavflidir va ko'p hollarda abort qilish uchun tibbiy ko'rsatma hisoblanadi. Ushbu infektsiyalar birgalikda TORCH kompleksi deb ataladi.

PCR tahlili homilador ayolning tanasida infektsiyaning mavjudligi yoki yo'qligini aniqlashga yordam beradi. Ko'pincha homiladorlikni rejalashtirish bosqichida yoki birinchi trimestrda amalga oshiriladi. Ijobiy natija bo'lsa, takroriy test talab qilinadi. Va faqat natijalar tasdiqlangandan keyin tegishli davolash belgilanadi.

OIV tashxisi uchun PCR

OIV infektsiyasini tashxislash uchun PCR usuli qimmat sinov bo'lib, maxsus ko'rsatmalar uchun qo'llaniladi. Bularga donorlik kiradi va u OIV bilan kasallangan odamlar bilan avtohalokatda jarohat olgan bemorlarga ham buyurilishi mumkin.

PCR organizmda OIVga qarshi antikorlar paydo bo'lishidan oldin erta bosqichlarda infektsiyaning mavjudligini aniqlashga yordam beradi. Natija yuqori ehtimollik bilan, tadqiqot virus kirib kelganidan 5-14 kun o'tgach ko'rsatilishi mumkin.

Boshqa hollarda, inson tanasida virus mavjudligi ferment bilan bog'liq immunosorbent tahlilini (ELISA) o'rnatishga yordam beradi. U odamning qonida OIVga qarshi antikorlarni aniqlaydi, ular infektsiyadan 1-3 oy o'tgach ishlab chiqarila boshlaydi. Mikroorganizmlar tahlilini miqdoriy aniqlash bemorlarni davolashni nazorat qilish uchun zarur.

Gepatit tashxisi uchun PCR

Virusli gepatit C jigar sirrozining rivojlanishiga olib keladigan jiddiy kasallikdir. 12 oygacha bo'lishi mumkin bo'lgan inkubatsiya davrida virus hech qanday tarzda o'zini namoyon qilmaydi, bemor amalda yuqumli emas va virusni muntazam qon tekshiruvi bilan aniqlash mumkin emas.

Ko'pincha, o'z vaqtida davolanmasa, kasallik surunkali holga keladi va ko'plab asoratlar bilan tahdid qiladi.

Gepatit B bilan kasallanganda, inkubatsiya davri unchalik uzoq emas va birinchi alomatlar 4 haftadan keyin kuzatilishi mumkin. Aynan shu davrda Elishay organizmda virus mavjudligini ko'rsatishi mumkin.

PCR usuli quyidagilarga imkon beradi:

• inkubatsiya rivojlanish bosqichida kasallikni aniqlash;
• boshqa tadqiqotlarning shubhali tahlillarini hal qilish;
• antiviral terapiya samaradorligini baholash.

Davolashdan keyin gepatit DNK virusining yo'qligi uning samaradorligining belgisidir.

Sil kasalligi testi

Sil kasalligining rivojlanishi inson tanasiga havo tomchilari orqali kirishi mumkin bo'lgan Koch tayoqchasi tomonidan qo'zg'atiladi. Kasallik ikki shaklga ega: yashirin va ochiq. Birinchi holda, yuqtirgan odam infektsiyaning tashuvchisi emas va balg'amdagi mikobakteriyalar hatto PCR bilan ham aniqlanmaydi. Ushbu shakl hali ham xavfga ega, chunki u ochiq bosqichga o'tishga qodir.

Ochiq (faol) bosqich, hatto shaxsiy gigiena qoidalariga qat'iy rioya qilingan taqdirda ham, boshqalarga xavf tug'diradi. Kasallikni aniqlash uchun fluorografi, tomografiya va ko'krak qafasi rentgenogrammasi qo'llaniladi. Shuningdek, bu maqsadda terining tuberkulyoz testi (Mantoux testi) qo'llaniladi. Ammo eng samarali tadqiqot usuli bu PCR.

Sinov namunalari sifatida quyidagi namunalar qo'llaniladi:

• qon;
• balg'am;
• bronxial suyuqlik.

HPV diagnostikasi uchun PCR

HPV diagnostikasi genital hududdagi papillomalar va si?illar kabi kasallik belgilari bo'lgan taqdirda amalga oshiriladi. Shuningdek, tadqiqot homiladorlikni rejalashtirish bosqichida, bepushtlik, abortlar, shuningdek, sheriklardan birining infektsiyasi holatida buyuriladi, chunki virusni yuqtirish mexanizmlaridan biri jinsiy yo'ldir.

Eng xavflisi bu virusning organizmda mavjudligi emas, balki uning turi. Uning ba'zi turlari (16 va 18) juda onkogendir va ayollarda bachadon bo'yni saratoniga olib kelishi mumkin. PCR usuli boshqa turdagi tadqiqotlar bilan birgalikda belgilanishi mumkin. Tahlil qilish uchun ko'pincha genital organlardan smear ishlatiladi. Qon, siydik va vaginal oqindi biomaterial sifatida kamdan-kam qo'llaniladi.

Herpes bilan

Ushbu test 1 va 2 turdagi herpes simplex virusi (HSV1/HSV2) bilan genital infektsiyani tashxis qiladi. Agar siz HSV2 uchun ijobiy bo'lsangiz, OIV va boshqa STDlar uchun testdan o'tishingiz kerak. Tahlil bemorning venoz qonini talab qiladi.
Agar alomatlar mavjud bo'lsa, siydik, oqindi va toshma tarkibi ham tekshirilishi mumkin.

Keng qamrovli PCR tekshiruvi

Agar ko'rsatmalar mavjud bo'lsa yoki kasalliklarning oldini olish maqsadida PCR bo'yicha testlar to'plami buyurilishi mumkin. Ko'pincha tashabbuskor bemorning o'zi bo'lib, ma'lum bir mintaqada ma'lum kasalliklarning tarqalishini oldini olish uchun keng qamrovli tekshiruv buyurilgan holatlar mavjud.

PCR-12 keng qamrovli tadqiqot bo'lib, quyidagi infektsiyalarni qamrab oladi:

1. Gepatit.
2. Herpes.
3. STD.
4. Sil kasalligi.
5. Ensefalit.
6. Kandidoz.
7. Helicobacter infektsiyasi.
8. Sitomegalovirus.
9. Mononukleoz.
10. Onkoviruslar.
11. Listerioz.

PCR tahlilini dekodlash

PCR tahlilidan so'ng ijobiy yoki salbiy natija e'lon qilinishi mumkin.

PCR diagnostikasining aniqligi

Ko'pgina hollarda PCR diagnostikasi yuqori aniq natijalar beradi. Ammo ba'zi hollarda tashxisning to'g'riligini tasdiqlash uchun qo'shimcha tadqiqot usullari talab qilinadi.

Noto'g'ri natijaga nima sabab bo'lishi mumkin?

Noto'g'ri ijobiy natijalar tahlilni yig'ish va tadqiqot jarayonini o'tkazish qoidalariga rioya qilmaslik natijasida yuzaga kelishi mumkin.

Bemorning o'zi biomaterialni yetkazib berish uchun etarli darajada tayyorgarlik ko'rmagan taqdirda noto'g'ri ma'lumotlarning aybdori bo'lishi mumkin. Laboratoriya jihozlari va shifokorning professionalligi tadqiqot natijalariga bevosita ta'sir qilishi mumkin.

PCR diagnostikasini qayerdan olish mumkin

PCR diagnostikasi profilaktika maqsadida shifokorning ko'rsatmasi yoki bemorning tashabbusi bilan xususiy klinikalar va laboratoriyalarda o'tkaziladi.
Tibbiyot bozorida bir necha yillardan beri mavjud bo'lgan va o'zini isbotlagan zamonaviy asbob-uskunalar bilan jihozlangan klinikalar va laboratoriyalarga ustunlik berish kerak.

PCR tahlili: narx va vaqt

Ushbu diagnostika usuli qimmat. Uning narxi har bir tur uchun 200 dan 500 rublgacha. Bir nechta infektsiyalarning mavjudligi uchun keng qamrovli tekshiruv har bir alohida tadqiqot uchun to'lov bilan solishtirganda sezilarli darajada tejash imkonini beradi.

Tadqiqotning davomiyligi infektsiya turiga bog'liq va 1 kundan 5 kungacha davom etishi mumkin. Shuningdek, bu ko'rsatkichlar laboratoriya jihozlari va tibbiyot xodimining malakasiga bog'liq.

PCR diagnostikasi (bu maqolada batafsil tavsiflangan) eng aniq va tezkor tadqiqot usuli hisoblanadi. Bu yigirmanchi asrning eng muhim kashfiyotlaridan biridir. tibbiyotda.

Ushbu usul tufayli ko'plab kasalliklarni to'liq davolash mumkin bo'ldi. Ammo shuni unutmangki, PCR ba'zi kamchiliklarga ega va uning samaradorligi ba'zan boshqa tadqiqot usullarini qo'llash bilan birga oshiriladi.

Maqola formati: Buyuk Vladimir

PCR diagnostikasi haqida video

PCR aniqligi haqida: