Polimeraz zincir reaksiyonu (PCR), kal?tsal patolojilerin, enfeksiyonlar?n, viral hastal?klar?n herhangi bir a?amada (akut veya kronik) ve ayr?ca - erken bir a?amada - hastal???n belirgin belirtilerinden ?nce te?his edilmesi alan?nda y?ksek hassasiyetli bir y?ntemdir. Hastadan al?nan ?rneklerde genetik materyal olan DNA, RNA'ya dayanarak patojenlerin tespiti yap?lmaktad?r. Ve bug?n polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) y?ntemlerinin ?z?, te?his a?amalar? ve ilkeleri ile maliyeti hakk?nda konu?aca??z.

Polimeraz zincir reaksiyonu nedir

Analizin temeli amplifikasyondur (ikiye katlama), yani insan genetik kompleksini temsil eden DNA'n?n k?sa bir b?l?m?nden (deoksiribon?kleik asit) bir?ok kopyan?n olu?turulmas?d?r. ?al??ma ?ok az miktarda fizyolojik madde (balgam, d??k?, epitel kaz?nt?lar?, prostat suyu, kan, sperm, amniyotik s?v?, mukus, plasental doku, idrar, t?k?r?k, plevral s?v?, beyin omurilik s?v?s?) gerektirir.

Bu durumda ?rne?in hastan?n genito?riner kanal?nda tek bir zararl? mikrop bile tespit edilebilmektedir.

PCR (polimeraz zincir reaksiyonu) tekni?i, 1993 y?l?nda Nobel ?d?l? alan Amerikal? bilim adam? K. Mullis taraf?ndan geli?tirildi.

• Aktif olarak kullan?lanlar:
• enfeksiyonlar?n erken tan?s?nda genetik;
• Adli t?p muayenesinde, inceleme i?in ?ok az miktarda DNA mevcut oldu?unda;
• veterinerlik, eczac?l?k, biyoloji, molek?ler genetik alanlar?nda;
• bir ki?inin DNA ile tan?mlanmas? i?in babal???n do?rulanmas?;

paleontoloji, antropoloji, ekoloji (?r?nlerin kalitesini, ?evresel fakt?rleri izlerken).

Bu video size polimeraz zincir reaksiyonunun ne oldu?unu ayr?nt?l? olarak anlatacakt?r:

Bula??c? hastal?klar?n tan?s?nda polimeraz zincir reaksiyonu, ?zellikle do?ruluk ve g?venilirlik a??s?ndan en g?venilir y?ntemlerden biridir. ?rne?in, klamidya ve di?er bir?ok patojen i?in PCR analizinin g?venilirli?i %100'e yak?nd?r (mutlak). ?o?u zaman, tan? s?ras?nda belirli bir patojeni tan?mlamakta zorluk ?eken hastalara polimeraz zincir reaksiyonu prosed?r? re?ete edilir.

Laboratuvar PCR testi kullan?l?r:

• k?lt?r veya imm?nolojik y?ntemler kullan?larak tan?mlanmas? zor olan idrar ve genital organ enfeksiyonlar?na neden olan patojenleri tespit etmek;
• ilk testin pozitif ancak ??pheli bir sonucu olmas? durumunda (?rne?in, AIDS ile enfekte ebeveynlerden gelen yenido?anlarda), ilk a?amada HIV'in yeniden te?hisi i?in;
• kanseri erken bir a?amada tan?mlamak (onkogen mutasyonlar?n?n incelenmesi) ve belirli bir hasta i?in tedavi rejiminin bireysel olarak d?zeltilmesi;
• kal?tsal patolojilerin erken te?hisi ve potansiyel tedavisi amac?yla.

B?ylece, gelecekteki ebeveynler genetik bir patolojinin ta??y?c?s? olup olmad?klar?n? ??renmek i?in bir teste girerler; PCR, kal?t?m yoluyla bula?an bir hastal??a maruz kalma olas?l???n? belirler.

• gebeli?in erken evrelerinde fetal patolojileri tespit etmek (b?y?yen embriyonun bireysel h?creleri olas? mutasyonlar?n varl??? a??s?ndan incelenir);
• organ nakli ?ncesi hastalarda - “doku tiplendirmesi” i?in (doku uyumlulu?unun belirlenmesi);
• don?r kan?ndaki tehlikeli patojen organizmalar? tan?mlamak;
• yenido?anlarda - gizli enfeksiyonlar? tan?mlamak i?in;
• Antiviral ve antimikrobiyal tedavinin sonu?lar?n? de?erlendirmek.

Neden b?yle bir prosed?r uygulans?n?

PCR, neredeyse% 100 sonu? veren olduk?a etkili bir te?his y?ntemi oldu?undan, prosed?r kullan?l?r:

• nihai tan?y? do?rulamak veya hari? tutmak;
• Tedavinin etkinli?inin h?zl? de?erlendirilmesi.

?o?u durumda, di?er bakteriyolojik, imm?nolojik ve virolojik tan? y?ntemleri i?e yaramazsa, geli?en bir hastal??? tespit etmek i?in m?mk?n olan tek test PCR'dir.

• Vir?sler, enfeksiyondan hemen sonra ve hastal?k belirtileri ortaya ??kmadan ?nce bir PCR prosed?r? kullan?larak tespit edilir. Vir?s?n erken tespiti h?zl? tedaviye olanak sa?lar.
• S?zde "viral y?k" (veya v?cuttaki vir?s say?s?) da kantitatif bir y?ntem kullan?larak DNA analizi ile belirlenir.
• Spesifik patojenlerin (?rne?in, Koch t?berk?loz basili) zordur ve k?lt?rlenmesi ?ok uzun s?rer. PCR analizi, test i?in uygun numunelerde minimum miktarda patojenin (canl? ve ?l?) h?zla tespit edilmesine olanak tan?r.

Ayr?nt?l? patojen DNA analizi kullan?l?r:

• acil tedaviye izin veren belirli antibiyotik t?rlerine duyarl?l???n? belirlemek;
• evcil ve vah?i hayvanlar aras?nda salg?n hastal?klar?n yay?lmas?n? kontrol etmek;
• ?nceki salg?nlar? k?r?kleyen yeni bula??c? mikrobiyal t?rlerin ve patojen alt t?rlerinin belirlenmesi ve izlenmesi.

Te?his t?rleri

Standart y?ntem

Polimeraz zincir reaksiyonu analizi, ?zel primer enzimleri kullan?larak belirli bir DNA ve RNA fragman?n?n ?oklu amplifikasyonu (iki kat?na ??kar?lmas?) temelinde ger?ekle?tirilir. Kopyalama zinciri sonucunda ara?t?rma i?in yeterli miktarda materyal elde edilir.

Prosed?r s?ras?nda, yaln?zca istenen par?a (belirtilen spesifik ko?ullara kar??l?k gelen) ve numunede ger?ekten mevcut olup olmad??? kopyalan?r.

Yararl? diyagramlar i?eren bu ayr?nt?l? video, PCR'nin nas?l ?al??t???n? a??klamaktad?r:

Di?er y?ntemler

• Ger?ek zamanl? PCR. Bu t?r ara?t?rmalarda, belirli bir DNA par?as?n? tan?mlama s?reci, 30 - 40 d?ng?den olu?an zincirin tamam?n? tamamlad?ktan sonra de?il, her d?ng?den sonra ba?lar. Bu t?r ara?t?rmalar v?cuttaki patojenin (vir?s veya mikrop) miktar? hakk?nda bilgi edinmenizi, yani niceliksel bir analiz yapman?z? sa?lar.
• RT-PCR (ters transkripsiyon modu). Bu test, genetik temeli RNA olan vir?sleri (?rne?in, hepatit C vir?s?, imm?n yetmezlik vir?s?) tespit etmek amac?yla tek sarmall? RNA'y? aramak i?in kullan?l?r. Bu ?al??mada ?zel bir enzim kullan?lm?? - ters transkriptaz ve spesifik bir primer ve RNA temelinde tek iplikli DNA olu?turulmu?tur. Daha sonra bu iplikten ikinci DNA ipli?i elde edilir ve standart prosed?r uygulan?r.

Test i?in endikasyonlar

PCR prosed?r? bula??c? hastal?klar, neonatoloji, kad?n do?um, pediatri, ?roloji, jinekoloji, z?hrevi hastal?k, n?roloji, nefroloji ve oftalmoloji klini?inde kullan?lmaktad?r.

Test endikasyonlar?:

• kal?tsal patoloji olas?l??? olan bir ?ocukta genetik anormallik geli?me riskinin belirlenmesi;
• hamileli?i planlarken her iki ebeveyne veya devam eden hamilelik s?ras?nda annenin ciddi durumuna tan? koymak;
• k?s?rl???n nedenlerini belirleyen gebe kalma zorluklar?;
• akut a?amada cinsel yolla bula?an enfeksiyon ??phesi ve kronik ge?i? belirtileri;
• bilinmeyen k?kenli inflamatuar s?re?lerin nedenlerinin tespiti;
• korunmas?z g?ndelik ve d?zenli cinsel temaslar;
• patojenik bir mikroorganizman?n spesifik antibiyotiklere duyarl?l???n?n belirlenmesi;
• Gizli enfeksiyon ??phesi olan hastalarda, bariz semptomlar?n ortaya ??kmas?ndan ?nce patojenlerin tespit edilmesi (klinik ?ncesi tan?);
• Hastalar?n hastal?ktan sonra iyile?mesini do?rulamak i?in (geriye d?n?k tan?);:

A?a??daki patojenleri do?ru bir ?ekilde tan?mlamak gerekiyorsa te?his de kullan?l?r::

• hepatit vir?sleri (A BCG), insan ba????kl?k yetersizli?i, sitomegalovir?s;
• Vibrio kolera;
• herpes simpleks vir?s?, herpetiform t?rler;
• retro - adeno - ve rinovir?sler;
• k?zam?k??k, Epstein-Barr, su ?i?e?i (Zoster) vir?sleri;
• parvo ve pikornovir?sler;
• Helicobacter pylori bakterisi;
• Legionella, Escherichia coli'nin patojenik t?rleri;
• Staphylococcus aureus;
• patojen;
• clostridia, difteri ve hemofilus influenzae;

Ayr?ca enfeksiyonlar? belirlemek i?in de kullan?l?r:

• bula??c? monon?kleoz;
• borreliosis, listeriyoz, kene kaynakl? ensefalit;
• Candida mantarlar?n?n neden oldu?u kandidiyaz;
• cinsel yolla bula?an enfeksiyonlar – trichomoniasis, ureaplasmosis, treponema pallidum, gardnerelloz, gonore, mikoplazmoz, klamidya;
• t?berk?loz.

Kontrendikasyonlar

??lem hastayla, v?cuda herhangi bir darbe almadan, ara?t?rma i?in al?nan biyolojik materyalle ger?ekle?tirildi?inden potansiyel bir tehlike bulunmad???ndan PCR i?in herhangi bir kontrendikasyon bulunmamaktad?r.

Ancak kolposkopi i?lemi sonras?nda rahim a?z? kanal?ndan biyomateryal toplanmaz. Smear ve kaz?malar?n analiz i?in sunulmas?na adetin bitiminden ve taburculu?un tamamen kesilmesinden sadece 4-6 g?n sonra izin verilir.

Y?ntem g?venli mi?

Laboratuvarda biyomateryali ?zerinde yap?lan izole bir ?al??ma s?ras?nda hasta ?zerinde olumsuz bir etki olu?mas? m?mk?n de?ildir.

Prosed?re haz?rl?k (biyolojik maddelerin analize sunulmas?)

Herhangi bir biyolojik s?v?, doku veya v?cut salg?s?, yabanc? bir patojenin DNA's?n? tespit eden PCR analizi i?in ?rnek g?revi g?r?r. Test maddesi damardan kan al?nmas?, g?rtlak, burun bo?lu?u, ?retra, plevra bo?lu?u, rahim a?z?ndan kaz?ma ?eklinde al?n?r.

Te?his i?leminden ?nce doktor hastaya hangi materyalin toplanaca??n? a??klar:

1. Cinsel yolla bula?an enfeksiyonlar? incelerken genital organlardan salg?lar, idrar ve ?retradan smear toplan?r.
2. Herpetik enfeksiyonlar i?in analiz yap?l?rken, analiz i?in sitomegalovir?s, monon?kleoz, idrar ve bo?az ?rne?i al?n?r; hepatit, toksoplazmoz i?in damardan kan al?n?r.
3. ?e?itli tipleri te?his etmek i?in beyin omurilik s?v?s? toplan?r.
4. G???s hastal?klar? biliminde analiz i?in ?rnekler balgam ve plevral s?v?d?r.
5. Hamilelik s?ras?nda olas? intrauterin enfeksiyonlara ili?kin bir ?al??ma yap?l?rken analiz i?in amniyotik s?v? ve plasental h?creler kullan?l?r.

Analizin g?venilirli?i ve do?rulu?u, malzemeyi al?rken ko?ullar?n sterilli?ine ba?l?d?r. PCR testi son derece hassas oldu?undan test maddesindeki herhangi bir kontaminasyon sonucu bozabilir.

Biyomateryalin teslimi i?in yetkin haz?rl?k, hastalar i?in herhangi bir zorluk yaratmaz. Belirli ?neriler var:

• Cinsel yolla bula?an enfeksiyonlar? analiz ederken:
  • materyali g?ndermeden 72 saat ?nce yak?n temaslar? hari? tutun;
  • 3 g?n ?ncesinden herhangi bir vajinal ?r?n? kullanmay? b?rak?n;
  • ?nceki g?n?n ak?am?ndan itibaren muayene edilen alan?n hijyenini ger?ekle?tirmeyin;
  • ?retradan bir ?rnek almadan 3-4 saat ?nce idrara ??kmay? hari? tutun;
• enfeksiyon testinden bir ay ?nce antibiyotik almay? b?rak?n;
• kan, sabahlar? yemek yemeden ve i?meden ?nce ba???lan?r;
• ?lk sabah idrar ?rne?i, iyice bir ?zel tuvaletten sonra steril bir kapta toplan?r.

Polimeraz zincir reaksiyonu y?ntemi kullan?larak te?hisin nas?l ger?ekle?tirildi?i hakk?nda a?a??y? okuyun.

Prosed?r nas?l i?liyor?

Bir PCR ?al??mas? ger?ekle?tirirken, bir reakt?rde (amplifikat?r veya termal d?ng?leyici) belirli d?ng?ler tekrar tekrar tekrarlan?r:

1. ?lk ad?m denat?rasyondur. Bir patojenin DNA's?n?n (veya RNA's?n?n) varl???ndan ??phelenilen t?k?r?k, kan, biyopsi materyali, jinekolojik ?rnekler, balgam, materyalin ?s?t?ld??? ve DNA'n?n iki ayr? zincire b?l?nd??? bir amplifikat?re yerle?tirilir.
2. ?kinci ad?m, malzemenin tavlanmas? veya hafif?e so?utulmas?d?r. ve buna DNA molek?l?nde istenen b?lgeleri tan?yabilen ve onlara ba?lanabilen primerlerin eklenmesi.
3. ???nc? ad?m uzamad?r– DNA iplik?iklerinin her birine 2 primer ba?land?ktan sonra meydana gelir. ??lem s?ras?nda patojenin DNA fragman? tamamlanarak kopyas? olu?turulur.

Bu d?ng?ler bir "zincirleme reaksiyon" gibi tekrarlan?r ve her seferinde belirli bir DNA par?as?n?n (?rne?in belirli bir vir?s?n programland??? b?l?m) kopyalar?n?n iki kat?na ??kmas?na yol a?ar. Birka? saat i?inde bir DNA fragman?n?n bir?ok kopyas? olu?turulur ve bunlar?n ?rnekteki varl??? tespit edilir. Bundan sonra sonu?lar analiz edilir ve enfeksiyonun t?r?n? belirlemek i?in ?e?itli patojen t?rlerinden olu?an bir veri taban?ndaki verilerle kar??la?t?r?l?r.

Sonu?lar?n kodunun ??z?lmesi ve PCR reaksiyonuna dayal? sonu? hakk?nda a?a??y? okuyun.

Sonu?lar?n kodunun ??z?lmesi

?al??man?n nihai sonucu, biyolojik materyalin teslim edilmesinden 1-2 g?n sonra a??klan?r. ?o?u zaman - analizden sonraki ilk g?nde.

Niteliksel analiz

• Negatif sonu?, test i?in g?nderilen maddede hi?bir bula??c? ajan izine rastlanmad??? anlam?na gelir.
• Olumlu sonu?, materyalin teslimi s?ras?nda biyolojik bir numunedeki patojenik vir?slerin veya bakterilerin ?ok y?ksek bir do?rulukla tespit edilmesi anlam?na gelir.

Sonu? pozitifse ancak enfeksiyonun artt???na dair herhangi bir belirti tespit edilmiyorsa v?cudun bu durumuna asemptomatik “sa?l?kl? ta??y?c?l?k” ad? verilir. Viral hastal?klarda en s?k biyomateryallerin belirli bir yerden (servikal kanal, ?retra, a??z bo?lu?u) al?nmas? s?ras?nda g?zlenir. Bu durumda tedavi gerekli de?ildir, ancak a?a??daki olas?l?klar mevcut oldu?undan s?rekli t?bbi g?zetim gereklidir:

• vir?s?n ta??y?c?lardan yay?lmas? ve sa?l?kl? ki?ilerin enfeksiyonu;
• s?recin aktivasyonu ve hastal???n kronik bir forma ge?i?i.

Ancak kan testi pozitifse bu, enfeksiyonun v?cuda ?arpt???n? g?sterir ve bu art?k ta??y?c? bir durum de?il, acil ?zel tedavi gerektiren bir patolojidir.

Kantitatif Analiz

Kantitatif sonu?, ?zellikle belirli bir enfeksiyon t?r? i?in bir uzman taraf?ndan belirlenir. Buna dayanarak, hastal???n geli?im derecesini ve evresini de?erlendirmek m?mk?nd?r, bu da do?ru tedaviyi derhal re?ete etmeyi m?mk?n k?lar.

Ortalama maliyet

Polimeraz zincir reaksiyonunun fiyatlar? ?unlara g?re belirlenir: ara?t?rman?n t?r?, patojeni tan?mlaman?n zorlu?u, biyolojik materyal toplaman?n zorlu?u, analiz t?r? (niteliksel veya niceliksel) ve laboratuvardaki fiyat d?zeyi.

?te yandan, PCR ?al???rken, analiz i?in bir t?r materyal toplarken ayn? anda birden fazla patojeni tan?mlamak m?mk?nd?r. Bu, di?er laboratuvar testlerinden tasarruf etmenizi sa?lar.

Ruble cinsinden PCR analizinin yakla??k maliyeti:

• gonococcus, gardnerella, trichomonas vajinalis – 180'den itibaren
• klamidya trachomatis - 190'dan itibaren
• papilloma vir?s? – 380'den 500'e
• kad?nlarda ?rogenital sistemin biyosenozu (mikrofloran?n niceliksel ve niteliksel de?erlendirmesi) - 800'den.

PCR testiyle ilgili daha da faydal? bilgiler a?a??daki videoda yer almaktad?r:

PCR (polimeraz zincir reaksiyonu), 20. y?zy?l?n sonlar?nda ve 21. y?zy?l?n ba?lar?nda klinik laboratuvar te?hisinin ana y?ntemlerinden biri olan ve t?p biliminin ?e?itli alanlar?nda muazzam faydalar sa?layan molek?ler biyolojinin bir ba?ar?s?d?r.

Bu nedenle, insan v?cudundaki milyonlarca h?cre aras?nda kaybolan canl? vir?s?n kendisi de?il, yaln?zca DNA's?n?n bir par?ac??? olsa bile, o zaman PCR, e?er ona hi?bir ?ey m?dahale etmezse, muhtemelen bu g?revle ba?a ??kacak ve varl???n? bildirecektir. olumlu sonu? veren bir “yabanc?n?n”. PCR'nin ?z? ve ana avantaj? budur.

Avantajlar? ve dezavantajlar?

PCR te?hisini ger?ekle?tiren laboratuvar, ekipman, test sistemleri ve t?bbi personelin nitelikleri a??s?ndan en y?ksek gereksinimlere tabidir. Bu, olduk?a hassas ve olduk?a spesifik reaktiflerden olu?an bir cephaneli?e sahip, y?ksek teknolojiye sahip bir laboratuvard?r, dolay?s?yla herhangi bir ?zel dezavantaj? yoktur. Klinik belirtilerin yoklu?unda olumlu sonu? vermedi?i ve dolay?s?yla klinisyeni ikilemde b?rakmad??? s?rece: Tedaviye ba?lamaya de?er mi, de?mez mi?

Hastay? g?zlemleyen doktor, hastal???n herhangi bir belirtisini g?rmedi?i i?in test sonu?lar?n?n g?venilirli?inden ??phe etmeye ba?lar. Ancak yine de PCR sisteminin y?ksek hassasiyeti g?z ?n?ne al?nd???nda, patojeni klinik ?ncesi a?amada bile tespit etti?i ve bu durumda olumlu sonucun dezavantajdan ?ok avantaj oldu?u unutulmamal?d?r. Buna dayanarak, ilgilenen hekimin, "lehine" ve "aleyhine" di?er arg?manlar? dikkate alarak tedavinin tavsiye edilebilirli?ine kendisi karar vermesi gerekir.

Polimeraz zincir reaksiyonu kullanarak te?hisin avantajlar? a??kt?r:

• Y?ksek ?zg?ll?k belirli bir organizmada bulunan, ancak insanlara yabanc? olan n?kleik asit par?ac?klar?n?n se?ilen ?rne?inde bulunmas? nedeniyle %100'e ula?an;
• Y?ksek performans PCR, numune alma g?n?nde test yapma olana?? sa?layan ve b?ylece hastay? gereksiz endi?elerden kurtaran y?ksek teknolojili otomatik bir teknik oldu?undan;
• Tek bir ?rnek ?zerinde ?al??an PCR, birden fazla ?al??ma yapma kapasitesine sahiptir. birden fazla patojeni tespit etmek e?er b?yle bir g?revi varsa. ?rne?in, PCR'nin ana y?ntemlerden biri oldu?u bir klamidyal enfeksiyonu te?his ederken, klamidya ile birlikte, nedensel ajan olan Neisseria (gonokok) da tespit edilebilir. ?stelik bu durum sonu?lar?n g?venilirli?ini olumsuz etkilemez;
• PCR testi kulu?ka d?neminde tehlikeli mikroorganizmalar? ortaya ??kar?r Hen?z v?cuda ciddi zarar verecek zamanlar? olmad???nda, yani erken te?his, patolojik s?recin yakla?makta olan geli?imi konusunda uyar?da bulunur, bu da ona haz?rlanmay? ve onu tamamen haz?rl?kl? hale getirmeyi m?mk?n k?lar.

Ayr?ca bazen te?his s?ras?nda ortaya ??kan yanl?? anlamalar? ?nlemek amac?yla PCR, gerekti?inde uzman ama?l? kullan?lmak ?zere sonu?lar?n?n kaydedilebilmesi (foto?raf, bilgisayar) ?zelli?iyle de kendini korumaktad?r.

PCR yan?tlar? i?in norm negatif bir sonu?tur. Yabanc? n?kleik asit par?alar?n?n bulunmad???n? belirten olumlu bir cevap, v?cutta enfeksiyonun varl???n? g?sterecektir, dijital de?erler vir?s?n durumunu ve test s?ras?ndaki konsantrasyonunu g?sterir. Ancak analizin eksiksiz yorumlanmas? “PCR” konusunda ?zel e?itim alm?? bir doktor taraf?ndan ger?ekle?tirilir. Sonu?lar? kendi ba??n?za yorumlamaya ?al??man?n bir anlam? yok, ??nk? b?y?k olas?l?kla yanl?? anlayabilir ve ?nceden endi?elenmeye ba?layabilirsiniz.

PCR “korkuyor”, ne yapabilir ve buna nas?l haz?rlan?lmal??

Di?er ara?t?rmalarda oldu?u gibi, bazen test sonu?lar? yanl?? pozitif veya yanl?? negatif olabilir PCR'nin bir istisna olmad??? durumlarda. Bu, a?a??daki durumlarda ger?ekle?ebilir:

1. Reaksiyonun a?amalar?ndan birinde teknolojik s?recin ihlali;
2. Malzemenin toplanmas?, saklanmas? veya ta??nmas?yla ilgili kurallara uyulmamas?;
3. Malzemede yabanc? yabanc? maddelerin varl???.

Bu, enfeksiyonlar?n PCR te?hisine dikkatli, ihtiyatl? ve do?ru bir ?ekilde yakla??lmas? gerekti?ini, aksi takdirde malzeme ?rneklerinin yap?sal yap?s?n? de?i?tirebilece?ini veya tamamen ??kebilece?ini g?stermektedir.

PCR te?hisinin a?amalar?. Yanl?? sonu?lar ?al??man?n herhangi bir a?amas?ndaki ihlallerden kaynaklanabilir.

Enfeksiyonlar?n PCR te?hisi, di?er laboratuvar y?ntemleri aras?nda "alt?n standartlar" kategorisine aittir, bu nedenle, ilk bak??ta birbiriyle hi?bir ortak yan? olmayan bir?ok hastal???n patojenlerini aramak i?in kullan?labilir:

• ?e?itli lokalizasyonlar?n t?berk?lozu, pn?moni (klamidyan?n neden oldu?u atipik dahil);
• ?ocukluk ?a?? enfeksiyonlar? (k?zam?k??k, k?zam?k??k, kabakulak, k?zam?k);
• Difteri;
• Salmonelloz;
• Zoonotik bula??c? hastal?k - listeriyoz (hastal?k, lenf d???mlerine, merkezi sinir sistemine ve i? organlara zarar veren ?e?itli semptomlarla karakterizedir);
• Epstein-Barr vir?s?n?n neden oldu?u hastal?klar (bula??c? monon?kleoz vb.);
• ?nsan papilloma vir?s? enfeksiyonunun (HPV ve t?rleri) neden oldu?u onkolojik patoloji;
• Borreliosis (Lyme hastal???, kene kaynakl? ensefalit);
• Nedensel ajan? insan midesinde ya?ayan mikrop Helicobacter pylori olan Helicobacter pylori enfeksiyonu. Helicobacter'in mide veya duodenum kanseri geli?imine neden oldu?u kan?tlanm??t?r;
• ve neredeyse her ?ey.

Cinsel yolla bula?an enfeksiyonlar?n PCR tan?s? ?zellikle ?nemlidir, ??nk? bu ?ekilde ortaya ??kan hastal?klar genellikle uzun s?re herhangi bir klinik belirti g?stermeden ilerler, ancak hamilelik s?ras?nda daha aktif hale gelmeye ba?lar ve dolay?s?yla sa?l???n? ve hatta ya?am?n? tehdit eder. ?ocuk. Benzer ?ekilde davran?yorlar. Bunlardan baz?lar? (“me?ale”) ayn? zamanda CYBE'lere de at?fta bulunmaktad?r, bu nedenle ikincisi daha ayr?nt?l? bir de?erlendirme gerektirir. Okuyucu, makalenin ilerleyen b?l?mlerinde en pop?ler y?ntemlerle tan??abilecektir.

G?venilir sonu?lar elde etmek i?in nas?l d?zg?n bir ?ekilde haz?rlan?l?r?

PCR haz?rl???n?n olduk?a basit oldu?unu ve hasta a??s?ndan herhangi bir ?zel ?aba gerektirmedi?ini hemen belirtelim. Sadece ?? basit g?revi tamamlaman?z gerekiyor:

1. Testi yapmadan 24 saat ?nce cinsel ili?kiye girmeyin;
2. Damardan kan al?p test etmek i?in a? karn?na gelmeniz gerekiyor, bu arada i?emezsiniz;
3. ?drar gece ba???lanmal?d?r (sabah - eczaneden bir g?n ?nce sat?n al?nan steril bir kavanozda).

PCR her t?rl? biyolojik ortamda ?al??abilir

PCR y?ntemi "kana susam??" de?ildir ve bu nedenle genellikle ??pheli bir enfeksiy?z ajan i?eren herhangi bir biyolojik ortam? kabul eder. Ara?t?rma i?in neyin al?naca??na dair se?im doktora kal?r.

Bu nedenle, bir patojen aray???nda, kan testine ek olarak (bu da uygun olmas?na ve ?o?u durumda di?er materyalle paralel olarak al?nmas?na ra?men) ?unlar? kullanabilirsiniz:

• (?rogenital sistemden ak?nt?);
• A??z bo?lu?u, konjonktiva, nazofarenks, genital sistemin mukoza zarlar?n?n kaz?nmas? (kad?nlar i?in rahim a?z? ve vajinadan, erkekler i?in - ?retradan al?n?r);
• T?k?r?k;
• Sperm;
• Prostat suyu;
• Plasenta dokusu ve amniyotik s?v? (amniyotik s?v?);
• ?rne?in baz? CYBE'leri ve Mycobacterium tuberculosis'i tespit etmek i?in idrar tortusu (santrif?jden sonra);
• Balgam ve plevra s?v?s? ayn? ama?la;
• Eks?dalar;
• Merkezi sinir sistemi enfeksiyonundan ??pheleniliyorsa beyin omurilik s?v?s?;
• Karaci?er, duodenum, mide vb. yerlerden al?nan biyopsi materyali (bioptat).

Yukar?dakilere, PCR ile test etmek b?y?k hacimler gerektirmedi?inden, genellikle al?nan birka? mikrolitrenin yeterli olmas? nedeniyle, her durumda, kaz?nt?larda ve salg?larda bile test i?in yeterli materyal olaca??n? eklemek isterim; Eppendorf mikrot?p?ne yerle?tirildi ve test i?in g?nderildi.

PCR hastal?klar? ve kullan?mlar?

HIV ve polimeraz zincir reaksiyonu

Genellikle isimsiz bir muayene yap?l?rken, imm?noblotlama sonu?lar?n?n pozitif olmas? durumunda tan? tekrar tekrarlan?r. Te?his do?rulan?rsa hastaya ek testler verilir:

1. Enfeksiyonun ilk ?nce etkiledi?i CD 4 lenfositlerin (imm?nokompetan h?creler - T yard?mc?lar? veya yard?mc?lar?) say?s?n?n mutlak de?erlerinin imm?nolojik reaksiyonlar kullan?larak belirlenmesi, ard?ndan temel ?zelliklerini kaybederler ve "kendi" aras?nda ayr?m yapamazlar. ve "yabanc?". Kan plazmas?nda dola?an viral RNA'y? normal v?cut h?creleriyle kar??t?r?rlar ve onlara tepki vermezler;
2. Viral RNA'n?n PCR ile tespiti ve bu verilere dayanarak patolojik s?recin a?amas?n?, ciddiyetini ve prognozu belirlemek i?in viral partik?l konsantrasyonunun hesaplanmas?. Tepki her zaman olumlu oldu?undan ve dijital de?erlerin de?ifre edilmesi doktorun yetkisinde oldu?undan elbette bu konuda “norm” kelimesi yoktur.

PCR ve hepatit

PCR y?ntemi patojenleri tespit edebilir; ?o?u zaman test, di?er y?ntemlerle tespit edilmesi zor olan hepatit C'yi te?his etmek i?in kullan?l?r.

Hepatit C vir?s? (RNA i?eren), insan v?cudundaki davran??? bak?m?ndan HIV'e benzer. Karaci?er h?crelerinin (hepatositler) genomuna s?k???p kalm?? halde, orada kanatlarda beklerken, en az 2 y?lda, hatta 20 y?lda gelebilen bu durum, doktorlar?n ona "nazik katil" ad?n? vermesinin nedenidir. Hepatit C, karaci?er parankiminde daha sonraki a?amalarda kendini g?steren malign bir s?recin olu?umuna yol a?ar. Ba????kl?k sistemi t?m bu olaylar? fark etmez ve vir?s? hepatosit zanneder. Do?ru, vir?se kar?? belirli miktarlarda antikorlar ?retiliyor, ancak bunlar yeterli bir ba????kl?k tepkisi sa?lam?yor. Hepatit C'yi te?his etmek i?in ELISA, vir?s?n iz b?rakt???n? g?sterdi?inden ?ok bilgilendirici de?ildir, ancak kendi kendine kaybolup kaybolmad??? bilinmemektedir. HCV'de kendi kendine iyile?me vakalar? bilinmektedir, ancak vir?se kar?? antikorlar ?m?r boyu kal?r ve dola??ma devam eder (imm?nolojik haf?za). PCR, antikor olu?umunun belirgin ?ekilde ilerisindedir ve viral bir par?ac??? 1-1,5 hafta i?inde tespit edebilirken, antikorlar 2 aydan alt? aya kadar bir s?re i?inde ortaya ??kabilir.

?nsan v?cudunda yayg?n hepatit C vir?s? ??phesi durumunda PCR te?hisi en uygun ara?t?rma y?ntemidir, ??nk? hastan?n kan?nda veya karaci?er biyopsisinde "nazik bir d??man?n" varl???n? yaln?zca bu ?ekilde tan?yabilir.

Ancak bazen antikorlar?n pozitif oldu?u ancak PCR sonucunun negatif oldu?u durumlar da vard?r. Bu bazen vir?s miktar? ?ok d???k oldu?unda veya kan dola??m?na girmeden karaci?erde "uykuda" durumda oldu?unda meydana gelir. Yine de ger?e?i bulabilmek i?in hastaya ikinci, hatta birden fazla test yap?l?r.

?nsan papilloma vir?s? enfeksiyonu

Kendi kendine iyile?me ger?ekle?mezse, PCR yap?lmad??? ve herhangi bir hastal?k belirtisi olmad??? i?in bundan ??phelenmeyen kona??n v?cudunda hi?bir ?ekilde kendini g?stermeden uzun s?re kalabilir. hastal?k. Bununla birlikte, gizli de olsa papillomavir?s enfeksiyonunun varl???, kansere neden olan belirli vir?s t?rlerinin (tip 16, 18) ?zel bir tehlike olu?turdu?u insan sa?l??? a??s?ndan kay?ts?z olmaktan uzakt?r.

Daha s?k olarak, n?fusun kad?n yar?s? HPV'den muzdariptir, ??nk? vir?s kad?n genital b?lgesini ve ?zellikle baz? vir?s t?rlerinin displastik s?re?lerin geli?imine katk?da bulundu?u rahim a?z?n? ve displazi tedavi edilmezse rahim a?z? kanserini tercih eder. ve vir?se dizginler serbest b?rak?ld?. Yani, polimeraz zincir reaksiyonu viral DNA'y? tespit edecek ve ard?ndan "k?t?" veya "iyi" (onkojenik veya onkogenik olmayan) tipin kad?n?n v?cuduna yerle?ti?ine i?aret edecektir.

Di?er CYBE ve TORCH enfeksiyonlar?

A??k?as?, polimeraz zincir reaksiyonu n?kleik asitlerden olu?an herhangi bir yabanc? yap?y? bulabilir, dolay?s?yla bu test t?m STD'leri ve TORCH enfeksiyonlar?n? tan?mlamak i?in uygundur, ancak her zaman kullan?lmaz. Daha eri?ilebilir ve daha ucuz olanlar varsa neden gonokoklar? tespit etmek i?in bu kadar pahal? ?al??malar y?r?telim?

TORCH enfeksiyonlar? ve CYBE o kadar birbiriyle ili?kilidir ki bazen belirli bir patojenin hangi gruba s?n?fland?r?lmas? gerekti?ini belirlemek zordur. Genel olarak bunlar? anlamak zor olabilir, ??nk? bunlar her zaman veya yaln?zca belirli ko?ullar alt?nda (ba????kl?k yetersizli?i) cinsel yolla bula?abilen olduk?a ?e?itli mikroorganizma gruplar?d?r ve v?cut ?zerindeki olas? olumsuz etkisi nedeniyle yaln?zca hamilelik s?ras?nda ilgi ?ekici olabilir. seyri ve fetus ?zerinde.

PCR, gizli enfeksiyonlar? tespit etmenin ana y?ntemidir

Klinik belirtilerin geli?imi, bazen ELISA ile birlikte, bazen de as?l g?revi olan PCR ile tespit edilebilen farkl? patojenlere dayanmaktad?r. ?zellikle hastal???n herhangi bir belirtisi yoksa tek do?rulay?c? test olarak. B?yle zor bir durum, bariz patojenlerin yan? s?ra f?rsat?? patojenleri de i?eren polimikrobiyal bir enfeksiyon taraf?ndan yarat?labilir.

Ureaplasma s?kl?kla mikoplazma ile birlikte d???n?l?r. Ve bu sebepsiz de?il. Bu t?rler, t?pk? klamidya gibi, ne vir?s ne de bakteridir; h?crelerin i?inde ya?arlar ve CYBE olarak s?n?fland?r?l?rlar, ancak sa?l?kl? bir v?cutta bulunmalar? da nadir de?ildir. Dolay?s?yla sa?l?kl? bir ta??y?c?y? hasta bir ki?iden ay?rmak i?in PCR'nin en g?venilir oldu?u kabul edilen ?zel y?ntemlere ihtiya? vard?r, ??nk? bu mikroorganizmalar?n yap?sal ?zellikleri ve davran??lar? nedeniyle di?er ?al??malar etkisizdir.

(Tip 1, 2) ve yine herpes vir?slerine (tip 5) ait olanlara gelince, buradaki durum da belirsizdir.

D?nya n?fusunun enfeksiyon oran? %100'e yakla??yor, dolay?s?yla bu durumda vir?s?n tan?mlanmas? ve dozu ?ok ?nemlidir, bu ?zellikle hamilelik s?ras?nda rol oynar, ??nk? bir yeti?kin i?in v?cudunda k?k salm?? bir vir?s vard?r. ?o?u zaman sorun yaratmaz ve hastal?k belirtisi vermez.

Bu nedenle, bir doktor taraf?ndan re?ete edilen b?yle bir muayene g?z ard? edilmemelidir, ??nk? baz? durumlarda polimeraz zincir reaksiyonu, yaln?zca bir kad?n? de?il ayn? zamanda k???k, do?mam?? bir ki?iyi de ciddi komplikasyonlardan koruyabilen zorunlu ve gerekli bir laboratuvar te?his y?ntemidir. Sonu? olarak PCR gibi harika bir y?ntemin 30 y?l? a?k?n s?redir insanl??a hizmet etti?ini belirtmek isterim. Ayn? zamanda testin ama?lar? bula??c? hastal?klar?n patojenlerinin ara?t?r?lmas?yla s?n?rl? de?ildir. Molek?ler biyoloji temelinde do?an polimeraz zincir reaksiyonu genetikle ayr?lmaz bir ?ekilde ba?lant?l?d?r. Adli t?pta ki?isel kimlik tespitinde ba?ar?yla kullan?ld?

, adli t?pta babal?k kurmak i?in, veteriner hekimlikte, e?er hayvan klini?inin pahal? ekipman sat?n alma f?rsat? varsa ve di?er alanlarda (sanayi, tar?m vb.).

Video: PCR - ?z? ve uygulamas?

PCR analizi, bug?n bula??c? hastal?klar?n te?hisinde kullan?lan yenilik?i y?ntemlerden biri olmas?na ra?men, geli?tiricisinin 1993 y?l?nda Nobel ?d?l?'n? almas?na ra?men, pek ?ok ki?i bunun ne oldu?unu bilmiyor. Bu y?ksek teknoloji y?ntemi, ciddi hastal?klar? erken a?amada tespit etmenize ve tedavilerine zaman?nda ba?laman?za olanak tan?r.

Analiz molek?ler biyolojinin prensiplerine dayanmaktad?r. PCR ara?t?rmas?, s?cakl?k ko?ullar?n?n etkisi alt?nda toplanan biyomateryalde bulunan bakteri ve vir?slerin RNA ve DNA's?n? kopyalayan ?zel bir enzimin kullan?lmas?n? i?erir.

• Bu t?r kitlesel ?reme, doktorun hastal??a neden olan bakterinin tam olarak hangi t?re ait oldu?unu belirlemesine ve biyomateryaldeki konsantrasyonunun seviyesini ?l?mesine olanak tan?r. Kopyalama prosed?r?, test t?plerini toplanan malzemeyle ?s?tan ve so?utan ve ?o?altma i?in uygun ko?ullar yaratan bir termal d?ng? cihaz? olan ?zel bir aparatta ger?ekle?tirilir.
• PCR testi bir?ok nedenden dolay? ger?ekle?tirilir, ancak ?o?u zaman a?a??dakiler gibi bula??c? hastal?klar?n varl???n? belirlemek i?in kullan?l?r:
• u?uk;
• hepatit;
• monon?kleoz;
• listeriyoz;
• sitomegalovir?s;
• t?berk?loz;
• insan papilloma vir?s?;
• kene kaynakl? ensefalit.

PCR analizi t?ptaki uygulamas?yla s?n?rl? de?ildir; olay yerinde bulunan biyolojik materyalin kime ait oldu?unu anlamak gerekiyorsa tarama s?kl?kla yap?l?r, yani PCR analizi adli t?pta yayg?n olarak kullan?l?r. Babal???n tespit edilmesi gerekiyorsa PCR i?in smear veya kan al?nmas?na dikkat edilmelidir. PCR te?hisinin sonu?lar? hi?bir ?ekilde ola?an DNA akrabal?k analizinden daha a?a?? de?ildir ve ?ok daha ucuzdur.

Te?his ?zellikleri

PCR analizinin ?ok say?da olumlu y?n? vard?r. ?ncelikle testin hassasiyetine dikkat etmek ?nemlidir. PCR analiz?r?, bakteriyel DNA molek?llerini k???k miktarlarda bile tespit edebilir, yani doktor, hastal???n erken evresi veya hastal???n kronik formunun ba?lang?c? hakk?nda bilgi al?r. PCR kan testi, gizli formda olan ve hi?bir ?ekilde kendini g?stermeyen bula??c? bir hastal???n varl???n? bile belirleyebilir.

Erkeklerde ve kad?nlarda PCR analizinin her t?rl? materyalin varl???nda yap?labilece?i, kan veya smear olmas?na gerek olmad???, t?k?r?k, cilt h?creleri ve hatta idrar?n bile i?e yarayaca?? unutulmamal?d?r.

PCR testlerinin sonu?lar? kapsaml? olabilir, ??nk? enfeksiyonlar?n PCR te?hisi, bir biyomateryal ?rne?inde bulunan bir?ok patojeni an?nda yakalayabilir. Analiz, biyomateryalin te?his sonu?lar?n?n 5 saat i?inde haz?r olmas? nedeniyle ki?inin k?sa s?rede ??renebilece?ini g?sterdi?i gibi, inceleme uygun olan herhangi bir zamanda tamamlanabilir.

T?m doktorlar, PCR veya di?er materyaller i?in yap?lan kan testinin, te?his metodolojisi do?ru ?ekilde takip edildi?i takdirde asla yanl?? sonu?lar vermeyece?ini kabul eder. PCR pozitif veya PCR negatif, yaln?zca laboratuvar personelinin y?ksek d?zeyde profesyonelli?e sahip olmamas? durumunda yanl?? olabilir. Ele ge?irilen biyomateryal kontamine olmu?sa veya yanl?? saklanm??sa PCR analizinin yorumlanmas? sonu?lar? bozabilir.

Te?his i?in haz?rlan?yor

Klamidya, ureaplasma veya herpes gibi cinsel yolla bula?an hastal?klar?n belirlenmesi gerekiyorsa, kad?nlar?n rahim a?z?ndan bir PCR smear al?n?r. Bir erkekte bu bakteriler i?in PCR testi gerekiyorsa, ?retradan bir ak?nt?, yani prostat suyu al?n?r. Hepatit, toksoplazmoz ve HIV'in tespiti isteniyorsa PCR y?ntemi kullan?larak kan test edilir. Bo?azdan bir ?ubuk al?narak monon?kleoz ve sitomegalovir?s i?in PCR testi yap?l?r. Akci?er enfeksiyonlar?n?n varl???na y?nelik polimeraz zincir reaksiyonu, balgam veya plevral s?v? gibi biyomateryal varl???nda ger?ekle?tirilir.

PCR, intrauterin enfeksiyonlar?n yan? s?ra fetal sinir sisteminin hastal?klar? ve patolojilerinden ??pheleniyorsan?z hamilelik s?ras?nda yap?l?r. Ara?t?rma i?in biyomateryal olarak hamile kad?ndan plasenta dokusu al?n?r. Bir ki?inin sinir sisteminde hasar varsa beyin omurilik s?v?s? incelenir. Helicobacter pylori gibi bakterileri tan?mlamak i?in mide ve duodenum biyopsileri kullan?l?r.

PCR idrar testi de s?kl?kla kullan?l?r, ancak kan testinden daha az tercih edilir. Bula??c? hastal?klar? tetikleyen patojenik mikroorganizmalar?n varl???n? g?rmenizi sa?lar, ancak bunlar?n kesin say?s?n? ve hastal???n geli?im derecesini g?steremez. Herhangi bir nedenle kan?n al?nmas? veya smear yap?lmas? m?mk?n de?ilse idrar PCR kullan?l?r. K???k ?ocuklarda enfeksiyonlar? ara?t?rmak i?in idrar PCR'nin kullan?labilece?i de unutulmamal?d?r. ?drar testi ayr?ca mesanede enfeksiyon ve inflamasyonun varl???n? da belirleyebilir, ta?lar?, kumu, sistit ve ?retriti belirleyebilir.

Yukar?da da bahsetti?imiz gibi elinizde herhangi bir biyomateryal varsa PCR testi yapt?rabilirsiniz. PCR analizinin ne oldu?unu biliyorsunuz, ayn? zamanda tan?ya nas?l haz?rlanaca??n?z? da bilmeniz gerekiyor. Haz?rl?k do?rudan neyin ??kar?laca??na ba?l?d?r; ?rne?in, sabahlar? cinsel organlar?n dikkatli hijyeninden sonra idrar ba???laman?z gerekir. Kan ba???? s?ras?nda a? karn?na ba???lan?r, daha do?rusu bir g?n ?nce herhangi bir ila? almay? b?rakmal?s?n?z. Kronik hastal?klar varsa, kullan?m i?in onaylanm?? ila?lar?n listesine tedaviyi yapan doktor taraf?ndan ayr? ayr? karar verilir.

D??k? analizi sabah dikkatli bir haz?rl?ktan sonra yap?l?r. Test arifesinde a??r yiyeceklerden ka??nmak ve cinsel organlar?n iyice hijyenini sa?lamak gerekir. Biyomateryal lavman kullan?larak ??kar?lm??sa d??k? analizi g?venilir olmayacakt?r; materyalin do?al olarak inmesi gereklidir. T?k?r?k ba???lamak i?in herhangi bir haz?rl?k yap?lmas?na gerek yoktur; sigaray? veya narenciye suyunu i?meyi b?rakmak yeterlidir.

Seks yoluyla bula?an hastal?klar? belirlemek i?in biyomateryali g?ndermeden ?nce hastalar?n PCR tan?s?ndan iki g?n ?nce cinsel temas? d??lamalar? gerekmektedir. Kad?nlar?n menstruasyondan iki g?n sonra menstruasyon s?ras?nda servikal smear almas? yasakt?r, aksi takdirde PCR yorumunda bilgiler ?arp?k olacakt?r.

Tarama sonu?lar?

Yaln?zca kalifiye bir doktor, PCR analizinin belirli bir hastan?n durumu hakk?nda ne s?yledi?ini ayr?nt?l? olarak a??klayabilir; formda belirtilen verileri ba??ms?z olarak anlamak kolay olmayacakt?r. Doktordan verileri de?ifre etmesini isterseniz, ?ncelikle sonucun olumlu mu yoksa olumsuz mu oldu?unu s?yleyecektir. Analizin negatif ??kmas? ki?inin sa?l?kl? oldu?u ve test materyalinde bakteri bulunmad??? anlam?na gelir. Olumlu bir sonu? olmas? durumunda, patojenin tam t?r? ve miktar? belirtilir; ayr?ca belirli imm?noglobulinlerin varl???yla enfeksiyonun tam olarak ne zaman olu?tu?unu da ??renebilirsiniz.

Hastan?n durumunu a??k?a yans?tabilen birka? imm?noglobulin s?n?f? vard?r:

1. IgG enfeksiyondan sonraki 4 hafta i?inde kanda geli?ir ve birka? y?la kadar kanda kalabilir. Bunlar her zaman bakteri g?stergesi de?ildir; bazen v?cudun benzer t?rde bir patojenle kar??la?t???na dair haf?zas? olarak hizmet ederler.
2. IgM - enfeksiyondan hemen sonra ortaya ??kar. Kural olarak, 5. g?nde zaten g?r?n?rler; bunlar, bakteriye sald?ran v?cudun ilk savunucular?d?r. ?ki hafta sonra kan sonu?lar?ndan kaybolurlar. Kan testinde mevcutsa, enfeksiyonun yak?n zamanda, yakla??k bir hafta ?nce meydana geldi?i varsay?labilir.
3. IgA v?cutta bakteriyel bir enfeksiyonun akut geli?imini veya kronik bir hastal???n tekrarlayan evresini i?aret eder.

Analizin olumlu sonu? verdi?i baz? durumlar vard?r, ancak ki?i kendini hi? de k?t? hissetmez. Bu kesinlikle bir te?his hatas?n? g?stermez; daha ziyade, hastal???n uykuda olan kronik bir formu vard?r veya hastal???n geli?imi yeni ba?lamaktad?r. ?u anda semptomlar? tetikleyebilecek yeterli bakteri yok.

Art?k analizin prensibini biliyorsunuz ve en ufak bir bula??c? hastal?k ??phesi varsa bu te?hise ba?vurabilirsiniz. Daha ileri tedavinin s?resi ve etkinli?i do?rudan, pratik olarak a?r?s?z olan te?hisin ne kadar h?zl? ge?ti?ine ba?l?d?r. Sa?l???n?z? s?rekli olarak iyi bir seviyede tutmak i?in, y?lda bir kez cinsel yolla bula?an hastal?klar?n yan? s?ra di?er organ enfeksiyonlar?na kar?? koruyucu PCR te?hisi yap?lmas? ?nerilir. Bir hastal??? ?nlemek, sonu?lar?yla daha sonra u?ra?maktan daha iyidir.

?o?u durumda hastalar, hastal???n incelenmesi veya belirlenmesi i?in PCR tan?s?n?n gerekli oldu?u bir durumla kar?? kar??ya kal?r. Ne oldu?unu ve neden gerekli oldu?unu anlamak ?nemlidir.

Polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) y?ntemi, bir?ok hastal???n geli?iminin ilk a?amalar?nda tan?mlanmas?na yard?mc? olan bir testtir. ??in ?z?, v?cutta bulunan patojenin DNA's?n? veya RNA's?n? bulmakt?r. PCR, di?er ara?t?rma t?rlerinin etkisiz oldu?u durumlarda patojeni belirlemenizi sa?lar.

Bu y?ntemin pop?laritesi basitli?i ve kullan?m geni?li?idir. Klinisyenler taraf?ndan ?e?itli hastal?klar?n te?hisinde kullan?l?r. Karma??k kantitatif ve genomik ?al??malar? h?zla y?r?tmenizi sa?lar.

Klasik PCR y?nteminin en ?nemli t?bbi uygulamalar?ndan biri patolojik durumlara neden olabilecek mikroorganizmalar?n tespitidir.

PCR analizinin ?z?

PCR te?hisi (ne oldu?u molek?ler biyoloji ile a??klanmaktad?r), herhangi bir genetik materyal i?eren ?rneklerde minimum miktarda bulunan k?sa bir DNA dizisini analiz etmek i?in kullan?lan bir molek?ler klonlama y?ntemidir. Bu y?nteme genellikle "DNA kopyalama makinesi" ad? verilir.

PCR te?hisi laboratuvarda in vitro (v?cut d???nda) ger?ekle?tirilir ve DNA'n?n b?l?nmeden ?nce ikiye katlanmas?n?n do?al s?recine dayan?r. Bir numunedeki vir?s, bakteri veya di?er mikroorganizmalar? tespit etme yetene?inin yan? s?ra, PCR bunlar?n miktar?n? belirlemenize de olanak tan?r.

Hepatit C vir?s? veya insan ba????kl?k yetersizli?i vir?s? (HIV) gibi hastal?klar i?in viral y?k, hastal???n nerede oldu?unun ve tedavinin ne kadar etkili oldu?unun iyi bir g?stergesidir.

Bu bilgilerle donanm?? doktorlar tedaviye ne zaman ba?layacaklar?n? belirleyebilir ve s?reci izleyebilir. Bu, her hasta i?in bireysel bir yakla??m olu?turmam?za olanak tan?r.

PCR te?hisi, her birinde hedef DNA miktar?n?n ?nemli ?l??de artt??? ?? a?amay? i?erir. Bu reaksiyonun sonucunda orijinal veya “hedef” DNA'n?n bir milyardan fazla kopyas? elde ediliyor ve bu da vir?s?n v?cuttaki varl???n? de?erlendirmeyi m?mk?n k?l?yor. Bu PCR y?nteminin ana ?zelli?idir.

Y?ntemin avantajlar? ve dezavantajlar?

PCR te?hisi (yukar?da a??klanan ?ey) 1983 y?l?nda Keri Mullis taraf?ndan ayr?nt?l? olarak a??klanm??t?r. O zamandan beri, y?ntem laboratuvar uygulamalar?nda son derece pop?ler hale geldi.

Bu t?r ara?t?rmalar?n ba?l?ca avantajlar? ?unlard?r:

• ?ok y?nl?l?k;
• sonu?lar?n h?z?;
• g?venilir sonu?lar elde etme olas?l??? y?ksek;
• ?zg?ll?k;
• tespit edilebilecek ?e?itli hastal?klar.

PCR y?nteminin ?ok y?nl?l???, herhangi bir insan fizyolojik materyalinin kullan?lma olas?l???nda yatmaktad?r. Analiz i?in bir sa? teli bile yeterlidir.

Otomasyon sayesinde veri i?leme s?reci birka? saat s?rebilir. ?zg?nl?k, belirli bir patojenin belirli bir DNA fragman?n?n karakteristi?inin izolasyonundan olu?ur. PCR analizi kullan?larak hem akut a?amada hem de latent a?amada bir?ok hastal???n tan?s? konulabilir.

Ancak ?ok say?da avantaja ra?men PCR te?his y?nteminin dezavantajlar? da vard?r:

• yanl?? pozitif sonu? olas?l???;
• y?ksek hassasiyet;
• Mikroorganizmalar?n de?i?kenli?i.

Y?ntemin ana dezavantaj?, PCR'nin canl? mikroorganizmalar? ?l? olanlardan ay?rt edememesidir.. Kural olarak bu, tedavinin ba?ar?s?n?n de?erlendirilmesi gereken bir durumu ifade eder. Bu durumda hastal?k tedavi edilmi?se ?l? h?creler bir s?re insan v?cudunda kal?r ve tamamen yenilenmesi 4 ila 6 hafta kadar bir s?re al?r.

Y?ksek hassasiyet bir avantaj oldu?u kadar ayn? zamanda dezavantajd?r. Baz? mikroorganizmalar v?cutta az miktarda bulunur. Bu nedenle bu durumda bu te?his y?ntemi bilgilendirici de?ildir ve di?er ara?t?rma t?rlerinin kullan?lmas? tavsiye edilir.

Her mikroorganizma mutasyona u?rayabilir. Amplifikasyon s?reci, de?i?ikliklere en az duyarl? olan belirli bir par?ay? kullansa da yine de mutasyonlar kazanabilir ve test sistemi taraf?ndan g?r?nmez hale gelebilir. Bu durum farkl? laboratuvar test sistemlerinin tamamen farkl? sonu?lar g?sterebilece?ini a??klamaktad?r.

Y?ntem hangi alanlarda kullan?l?yor?

PCR testi klinik uygulamada ?e?itli hastal?klar? tan?mlamak i?in kullan?labilir. Jinekoloji, ?roloji, gastroenteroloji, onkoloji vb. alanlarda yayg?n olarak kullan?lmaktad?r. Ayr?ca adli t?pta kimlik tespiti ve babal?k tespiti amac?yla etkin bir ?ekilde kullan?lmaktad?r.

Bu t?r ?al??malar planlama a?amas?nda ve hamilelik s?ras?nda kullan?l?r. Bir kad?n?n v?cudunda enfeksiyon varl???n? tespit etmek i?in TORCH enfeksiyonlar?n?n analizi yap?l?r. Enfeksiyonlardan birinin neden oldu?u hastal?klar bir kad?n i?in hafif olabilir, ancak fet?ste ?l?m de dahil olmak ?zere ciddi konjenital kusurlara neden olabilir.

Ayr?ca PCR tan? y?ntemi, ki?inin gelecekte belirli hastal?klara yakalanma konusundaki genetik yatk?nl???n?n belirlenmesine yard?mc? olur.

PCR te?hisiyle hangi enfeksiyonlar tespit edilebilir?

PCR y?ntemi vir?s, bakteri ve mantarlar?n tan?mlanmas?na yard?mc? olur.

Bunu kullanarak te?his edilebilecek en yayg?n hastal?klar:

Hangi biyolojik materyaller ?zerinde ?al???l?yor?

?al??man?n hastal???, semptomlar? ve hedefleri dikkate al?nd???nda, PCR te?hisinde herhangi bir fizyolojik s?v? veya doku par?ac??? kullan?labilir.

Olabilir:

• kan;
• t?k?r?k;
• balgam;
• idrar;
• d??k?;
• orofaringeal s?r?nt?;
• etkilenen doku par?as?;
• sinovyal s?v?;
• kad?nlarda vajinadan veya erkeklerde ?retradan kaz?ma;
• bo?almak;
• sa? ve di?erleri.

Genito?riner sistem hastal?klar? i?in kad?nlarda vajinadan veya erkeklerde ?retradan idrar veya smear al?n?r. HIV, ?e?itli hepatit t?rleri ve TORCH enfeksiyonlar? gibi hastal?klar?n te?hisi i?in ven?z kan ba???? yap?l?r.

Onkolojiyi d??lamak veya do?rulamak i?in cerrahi m?dahaleler s?ras?nda biyopsi i?in doku par?alar? ??kar?l?r.

Analize nas?l haz?rlan?l?r

Ara?t?rmaya haz?rl???n ?zellikleri sunulan biyomateryale ba?l?d?r. Ayr?ca antibiyotik ve di?er ila?lar? almaktan ka??nman?z gerekti?ini de unutmamal?s?n?z. Tedavinin etkinli?ini izlemek i?in ila?lar? ald?ktan sonraki aral?k en az 4 hafta s?rd?r?lmelidir.

Kan sabahlar? a? karn?na ba???lan?r. ?drar ve d??k? belirlenmi?, tamamen steril bir kaba konulmal?d?r. Ayn? zamanda idrar toplamadan ?nce d?? cinsel organlar?n hijyenini sa?lamak gerekir.

Smear testi yapt?r?yorsan?z ?unlar? yapmal?s?n?z:

• 3 saat boyunca idrara ??kmay?n;
• Bir g?n ?nce y?kan?p du? yap?lmas? tavsiye edilmez (kad?nlar i?in);
• cinsel aktiviteyi bir g?n ?nceden durdurun;
• Kad?nlar adet d?neminin ortas?nda smear testi yapt?rmal?d?r.

PCR ara?t?rmas?n?n a?amalar?

PCR'ye ba?lamadan ?nce ?rnekten DNA ekstrakte edilmelidir. DNA ekstraksiyonu manuel veya aletli olarak ger?ekle?tirilebilen ?ok ad?ml? bir i?lemdir.

Numune haz?rland?ktan sonra ?? ad?ml? PCR s?reci ba?lar:

• hedef DNA'n?n ayr?lmas? (denat?rasyon);
• DNA fragmanlar?n?n amplifikasyonu (?o?alt?lmas?);
• g??lendirilmi? DNA fragmanlar?n?n tespiti (tespiti).

PCR'nin ilk a?amas?na denat?rasyon denir.?z?, DNA ?rnekleri i?eren bir test t?p?n?n y?ksek s?cakl?klara (yakla??k 90 derece) ?s?t?lmas?d?r. Y?ksek s?cakl?klar nedeniyle molek?llerin kodunu olu?turan n?kleotidler aras?ndaki zay?f ba?lar tahrip olur. Bu, ?ift sarmall? DNA veya RNA'n?n iki ayr? sarmal halinde b?l?nmesiyle sonu?lan?r.

?al??man?n "safl???" i?in, incelenen biyomateryale organik maddeleri ??zen ?zel bir ??zelti eklenir. Bu a?aman?n s?resi test edilen malzemenin t?r?ne ve bula??c? ajana ba?l?d?r.

?kinci a?amada PCR te?hisi (yukar?da a??kland??? gibi), enfeksiyonun DNA's?na dayanarak DNA par?alar?n? yeniden ?retir. PCR bir ?rnekteki t?m n?kleik asitleri kopyalamaz. Yaln?zca ?zel bir genetik kod dizisini, k?sa bir par?ay? (primer) kopyalar.

?kinci a?amada deney t?p? so?utulur. T?m PCR s?reci, termostat veya d?ng?leyici ad? verilen bir makine kullan?larak otomatikle?tirilir ve birka? saat i?inde tamamlanabilir. PCR makinesi reaksiyon kar???m?n?n s?cakl???n? birka? dakikada bir de?i?tirecek ?ekilde programlanm??t?r. Bu, k?sa par?alar?n tek sarmall? ?ablona ba?lanabilmesi i?in ger?ekle?ir.

Amplifikasyon 30-40 d?ng?de ger?ekle?ir. Bu s?re zarf?nda laboratuvar doktoru DNA par?as?n? kopyalar ve zincirleme reaksiyon y?ntemini kullanarak miktar?n? artt?r?r. B?ylece her d?ng?de kopya say?s? birka? milyona, hatta milyarlara ??kar.

?al??man?n ???nc? a?amas?nda vir?s ve bakterilerin DNA's?n?n varl??? tespit ediliyor. Bu, elde edilen kar???m?n da??t?lmas? ve buna ?zel bir ??zelti eklenmesiyle yap?l?r. Bu s?v?, DNA par?alar?n?n ultraviyole ???nlar?n etkisi alt?nda belli bir renk kazanmas?n? sa?lar. Bu, insan v?cudunda patojen mikroplar?n bulundu?unun bir g?stergesidir.

Hamilelik s?ras?nda PCR

PCR te?hisi (yukar?da anlat?ld??? gibi), zorunlu bir prosed?r oldu?u i?in ilk kez hamilelik s?ras?nda re?ete edilebilir. Bu y?ntem, gizli enfeksiyonlar?n ve fet?ste kusur geli?me riskinin belirlenmesine yard?mc? olur.

Analizi ger?ekle?tirmek i?in ?unlar? kullan?n:

Fet?s?n geli?imini olumsuz y?nde etkileyebilecek, kusurlara neden olabilecek, erken do?uma ve d???klere neden olabilecek bula??c? hastal?klar vard?r. Bunlar ?zellikle hamileli?in ilk ?? ay?nda tehlikelidir ve ?o?u durumda hamileli?in sonland?r?lmas? i?in t?bbi bir endikasyondur. Bu enfeksiyonlara topluca TORCH kompleksi ad? verilir.

PCR analizi, hamile bir kad?n?n v?cudunda enfeksiyonun varl???n? veya yoklu?unu belirlemeye yard?mc? olur. ?o?unlukla hamileli?in planlama a?amas?nda veya ilk trimesterde yap?l?r. Sonu? pozitif ise testin tekrarlanmas? gerekir. Ve ancak sonu?lar?n onaylanmas?ndan sonra uygun tedavi re?ete edilir.

HIV tan?s? i?in PCR

HIV enfeksiyonunu te?his etmek i?in kullan?lan PCR y?ntemi pahal? bir testtir ve ?zel endikasyonlar i?in kullan?l?r. Bunlara ba??? da dahildir ve ayr?ca HIV ta??yan ki?ilerle bir araba kazas?nda yaralanan hastalara da re?ete edilebilir.

PCR, v?cut HIV'e kar?? antikor ?retmeden ?nce enfeksiyonun varl???n? erken tespit etmeye yard?mc? olur. Y?ksek bir olas?l?k y?zdesiyle ?al??ma, vir?s?n giri?inden sonraki 5-14 g?n i?inde sonucu g?sterebiliyor.

Di?er durumlarda, insan v?cudunda bir vir?s?n varl???, enzime ba?l? imm?nosorbent tahlilinin (ELISA) kurulmas?na yard?mc? olur. Bir ki?inin kan?nda enfeksiyondan 1-3 ay sonra ?retilmeye ba?layan HIV antikorlar?n? tespit eder. Hastalar?n tedavisini izlemek i?in mikroorganizmalar?n kantitatif tespiti ve analizi gereklidir.

Hepatit tan?s? i?in PCR

Viral hepatit C, karaci?er sirozunun geli?mesine yol a?abilecek ciddi bir hastal?kt?r. 12 aya kadar s?rebilen kulu?ka d?neminde vir?s hi?bir ?ekilde kendini g?stermez, hasta pratikte bula??c? de?ildir ve rutin kan testiyle vir?s tespit edilemez.

?o?u zaman, zaman?nda tedavi edilmezse hastal?k kronikle?ir ve bir?ok komplikasyonla tehdit eder.

Hepatit B ile enfekte olundu?unda kulu?ka s?resi ?ok uzun de?ildir ve ilk belirtiler 4 hafta sonra ortaya ??kabilir. Bu d?nemde ELISA, vir?s?n v?cutta varl???n? g?sterebilmektedir.

PCR y?ntemi ?unlar? sa?lar:

• kulu?ka geli?imi a?amas?nda hastal??? tan?mlamak;
• di?er ?al??malar?n ??pheli analizlerini ??zmek;
• Antiviral tedavinin etkinli?ini de?erlendirmek.

Tedaviden sonra DNA hepatit vir?s?n?n g?r?lmemesi, etkinli?inin bir i?aretidir.

T?berk?loz testi

T?berk?lozun geli?imi, havadaki damlac?klar yoluyla insan v?cuduna girebilen Koch basili taraf?ndan tetiklenir. Hastal???n iki ?ekli vard?r: gizli ve a??k. ?lk durumda, enfekte ki?i enfeksiyonun ta??y?c?s? de?ildir ve balgamdaki mikobakteriler PCR kullan?larak bile tespit edilmez. Bu form a??k sahneye girebildi?i i?in hala tehlikelidir.

A??k (aktif) a?ama, ki?isel hijyen kurallar?na s?k? s?k?ya uyulsa bile ba?kalar? i?in tehlike olu?turur. Hastal??? te?his etmek i?in florografi, tomografi ve g???s r?ntgeni kullan?l?r. Ayr?ca bu ama?la t?berk?lozlu deri testi (Mantoux testi) kullan?l?r. Ancak en etkili ara?t?rma y?ntemi PCR'dir.

A?a??daki numuneler test numuneleri olarak kullan?l?r:

• kan;
• balgam;
• bron? s?v?s?.

HPV tan?s? i?in PCR

HPV tan?s?, hastal???n genital b?lgede papillom ve si?il gibi semptomlar?n?n varl???nda ger?ekle?tirilir. Ayr?ca, vir?s?n bula?ma mekanizmalar?ndan biri cinsel oldu?u i?in, ?al??ma hamilelik planlamas? a?amas?nda, k?s?rl?k, d???kler ve e?lerden birinin enfeksiyonu durumunda da re?ete edilir.

En tehlikelisi vir?s?n v?cutta bulunmas? de?il, t?r?. Tiplerinden baz?lar? (16 ve 18) olduk?a onkojeniktir ve kad?nlarda rahim a?z? kanserine neden olabilir. PCR y?ntemi di?er ara?t?rma t?rleriyle birlikte re?ete edilebilir. Analiz i?in en s?k genital organlardan bir smear kullan?l?r. Biyomateryal olarak kan, idrar ve vajinal ak?nt? son derece nadir olarak kullan?lmaktad?r.

U?uk i?in

Bu test, herpes simpleks vir?s? tip 1 ve 2 (HSV1/HSV2) ile genital enfeksiyonu te?his eder. HSV2 sonucu pozitifse HIV ve di?er cinsel yolla bula?an hastal?klar a??s?ndan test yapt?rmal?s?n?z. Analiz hastan?n ven?z kan?n? gerektirir.
Semptomlar mevcutsa idrar, sekresyonlar ve d?k?nt? i?erikleri de incelenebilir.

Kapsaml? PCR incelemesi

Belirtildi?i takdirde veya hastal???n ?nlenmesi amac?yla bir dizi PCR testi re?ete edilebilir. ?o?u zaman, ba?lat?c? hastan?n kendisidir; belirli bir b?lgede belirli hastal?klar?n ortaya ??kmas?n? ?nlemek i?in kapsaml? bir muayenenin ?nerildi?i durumlar vard?r.

PCR-12 a?a??daki enfeksiyonlar? kapsayan kapsaml? bir ?al??mad?r:

1. Hepatit.
2. U?uk.
3. STD.
4. T?berk?loz.
5. Ensefalit.
6. Kandidiyaz.
7. Helicobacter pylori enfeksiyonu.
8. Sitomegalovir?s.
9. Monon?kleoz.
10. Onkovir?sler.
11. Listeriosis.

PCR analizinin a??klamas?

PCR y?ntemi kullan?larak yap?lan analiz sonras?nda pozitif veya negatif sonu? a??klanabilmektedir.

PCR te?hisinin do?rulu?u

?o?u durumda, PCR te?hisi olduk?a do?ru sonu?lar sa?lar. Ancak baz? durumlarda do?ru tan?y? do?rulamak i?in ek ara?t?rma y?ntemlerine ihtiya? duyulur.

Yanl?? sonuca ne sebep olabilir?

Yanl?? pozitif sonu?lar, analizin toplanmas? ve ara?t?rma prosed?r?n?n kendisinin y?r?t?lmesi kurallar?na uyulmamas?ndan kaynaklanabilir.

Biyomateryalin teslimi i?in yeterli haz?rl?k yap?lmamas? durumunda yanl?? bilginin su?lusu hastan?n kendisi olabilir.

Laboratuvar?n donan?m? ve doktorun profesyonelli?i ?al??man?n sonu?lar?n? do?rudan etkileyebilir.

PCR te?hisi nereden al?n?r?
PCR tan?lar?, ?nleme amac?yla ?zel klinik ve laboratuvarlarda doktor talimat?yla veya hastan?n kendi inisiyatifiyle yap?lmaktad?r.

Birka? y?ld?r t?bbi piyasada yer alan ve kendini kan?tlam??, modern ekipmanlara sahip klinik ve laboratuvarlar tercih edilmelidir.

PCR analizi: maliyet ve zamanlama

Bu te?his y?ntemi pahal?d?r. Her t?r i?in fiyat? 200 ila 500 ruble aras?nda de?i?mektedir. ?e?itli enfeksiyonlar?n varl???na y?nelik kapsaml? bir muayene, her bir muayene i?in ?deme yap?lmas?na k?yasla ?nemli ?l??de tasarruf sa?layabilir.

?al??man?n s?resi enfeksiyonun t?r?ne ba?l?d?r ve 1 ila 5 g?n s?rebilir. Ayr?ca bu g?stergeler laboratuvar?n donan?m?na ve t?bbi ?al??an?n niteliklerine ba?l?d?r.

Bu y?ntem sayesinde bir?ok hastal???n tam tedavisi m?mk?n hale geldi. Ancak PCR'?n baz? dezavantajlar?n?n da bulundu?unu ve bazen di?er ara?t?rma y?ntemlerinin kullan?lmas?yla birlikte etkinli?inin artt???n? da unutmamal?y?z.

Makale format?: B?y?k Vladimir

PCR te?hisi hakk?nda video

PCR do?rulu?u hakk?nda: