Polimerazna lan?ana reakcija (PCR) je visokoprecizna metoda u podru?ju dijagnosticiranja nasljednih patologija, infekcija, virusnih bolesti u bilo kojoj fazi (akutnoj ili kroni?noj), kao i - u ranoj fazi - prije o?iglednih manifestacija bolesti identifikacijom patogene na osnovu njihove DNK, RNK, koji su genetski materijal, u uzorcima koji se uzimaju od pacijenta. A danas ?emo govoriti o su?tini, dijagnosti?kim fazama i principima metoda polimerazne lan?ane reakcije (PCR), kao io njegovoj cijeni.

?ta je polimerazna lan?ana reakcija

Osnova analize je amplifikacija (udvostru?avanje) - stvaranje velikog broja kopija iz kratkog dijela DNK (deoksiribonukleinske kiseline), koji predstavlja ljudski genetski kompleks. Za ispitivanje je potrebna vrlo mala koli?ina fiziolo?kih supstanci (sputum, feces, struganje epitela, sok prostate, krv, sperma, plodova voda, sluz, placentno tkivo, urin, pljuva?ka, pleuralna te?nost, likvor). U ovom slu?aju, na primjer, ?ak i jedan ?tetni mikrob mo?e se otkriti u urogenitalnom traktu pacijenta.

PCR tehniku (lan?ana reakcija polimeraze) razvio je ameri?ki nau?nik K. Mullis, koji je dobio Nobelovu nagradu 1993. godine.

Aktivno kori?ten:

• u ranoj dijagnostici infekcija, genetskih,;
• u forenzi?kom medicinskom pregledu u prisustvu izuzetno male koli?ine DNK za istra?ivanje;
• u veterinarskoj medicini, farmaciji, biologiji, molekularnoj genetici;
• za identifikaciju osobe po DNK, potvrda o?instva;
• u paleontologiji, antropologiji, ekologiji (prilikom pra?enja kvaliteta proizvoda, faktora sredine).

Ovaj video ?e vam re?i ?ta je lan?ana reakcija polimeraze:

Kome je dodijeljen

Lan?ana reakcija polimeraze u dijagnostici zaraznih bolesti jedna je od najpouzdanijih metoda visoke to?nosti i pouzdanosti. Na primjer, pouzdanost PCR analize na klamidiju i mnoge druge patogene pribli?ava se 100% (apsolutno). Naj?e??e se postupak lan?ane reakcije polimerazom propisuje pacijentima koji prilikom postavljanja dijagnoze imaju pote?ko?a u identifikaciji odre?enog patogena.

Laboratorijski PCR test se koristi:

• otkrivanje patogena koji uzrokuju infekcije mokra?nih i genitalnih organa, koje je te?ko identificirati usjevima ili imunolo?kim metodama;
• za ponovnu dijagnozu HIV-a u po?etnoj fazi u slu?aju pozitivnog, ali upitnog rezultata po?etne analize (na primjer, kod novoro?en?adi od roditelja zara?enih AIDS-om);
• utvr?ivanje onkolo?ke bolesti u ranoj fazi (prou?avanje onkogenih mutacija) i individualna korekcija re?ima lije?enja za odre?enog pacijenta;
• u svrhu ranog otkrivanja i potencijalnog lije?enja nasljednih patologija.

Dakle, budu?i roditelji se testiraju kako bi se utvrdilo da li su nosioci genetske patologije, a kod djece PCR odre?uje vjerovatno?u izlo?enosti nasljednoj bolesti.

• za otkrivanje fetalnih patologija u ranoj fazi gestacije (pojedina?ne ?elije rastu?eg embrija se ispituju na mogu?e mutacije);
• kod pacijenata prije transplantacije organa - za "tipizaciju tkiva" (odre?ivanje kompatibilnosti tkiva);
• otkrivanje opasnih patogenih organizama u darovanoj krvi;
• kod novoro?en?adi - za otkrivanje latentnih infekcija;
• za procjenu rezultata antivirusnog i antimikrobnog lije?enja.

Za?to prolaziti kroz ovu proceduru?

Budu?i da je PCR visoko efikasna dijagnosti?ka metoda koja daje gotovo 100% rezultat, koristi se postupak:

• potvrditi ili isklju?iti kona?nu dijagnozu;
• brza procjena efikasnosti terapije.

U mnogim slu?ajevima, PCR je jedini mogu?i test za otkrivanje bolesti u razvoju ako su druge bakteriolo?ke, imunolo?ke i virolo?ke dijagnosti?ke metode beskorisne.

• Virusi se detektuju PCR-om neposredno nakon infekcije i prije pojave znakova bolesti. Rano otkrivanje virusa omogu?ava brzo lije?enje.
• Takozvano “virusno optere?enje” (ili broj virusa u tijelu) se tako?er odre?uje kvantitativnom analizom DNK.
• Specifi?ni patogeni (kao ?to je Kochov bacil tuberkuloze) su te?ki i predugo se uzgajaju. PCR analiza vam omogu?ava da brzo identifikujete minimalni broj patogena (?ivih i mrtvih) u uzorcima koji su pogodni za istra?ivanje.

Detaljna analiza DNK patogena se koristi:

• utvrditi njegovu osjetljivost na odre?ene vrste antibiotika, ?to vam omogu?ava da odmah zapo?nete lije?enje;
• kontrolirati ?irenje epidemija me?u doma?im, divljim ?ivotinjama;
• identificirati i pratiti nove zarazne mikrobne vrste i podtipove patogena koji su potaknuli prethodne epidemije.

Vrste dijagnostike

Standardna metoda

Analiza lan?ane reakcije polimeraze vr?i se na osnovu vi?estruke amplifikacije (udvostru?avanja) specifi?nog DNK i RNK fragmenta upotrebom posebnih prajmer enzima. Kao rezultat lanca kopiranja dobija se koli?ina materijala dovoljna za istra?ivanje.

Tokom postupka kopira se samo ?eljeni fragment (koji odgovara specificiranim uslovima) ?ak i ako je stvarno prisutan u uzorku.

Ovaj detaljni video sa korisnim dijagramima govori kako PCR radi:

Druge metode

• PCR u realnom vremenu. U ovoj vrsti studija, proces identifikacije datog DNK fragmenta po?inje nakon svakog ciklusa, a ne nakon ?to se zavr?i cijeli lanac od 30-40 ciklusa. Ova vrsta studije omogu?ava vam da dobijete informacije o koli?ini patogena (virusa ili mikroba) u tijelu, odnosno da izvr?ite kvantitativnu analizu.
• RT-PCR (re?im reverzne transkripcije). Ovaj test se koristi za pronala?enje jednolan?ane RNK za otkrivanje virusa ?ija je genetska baza RNA (na primjer, virus hepatitisa C, virus imunodeficijencije). U takvoj studiji koristi se poseban enzim - reverzna transkriptaza i odre?eni prajmer, a jednolan?ana DNK se gradi na bazi RNK. Zatim se iz ovog lanca obnavlja drugi lanac DNK i izvodi se standardni postupak.

Indikacije za dr?anje

PCR postupak se koristi u klinici za infektivne bolesti, neonatologiji, aku?erstvu, pedijatriji, urologiji, ginekologiji, venerologiji, neurologiji, nefrologiji, oftalmologiji.

Indikacije za svrhu analize:

• poja?njenje rizika od razvoja genetskih abnormalnosti kod djeteta s vjerojatno??u nasljednih patologija;
• dijagnosticiranje oba roditelja prilikom planiranja trudno?e ili ozbiljnog stanja majke u toku trudno?e;
• pote?ko?e sa za?e?em, identifikacija uzroka neplodnosti;
• sumnja na spolne infekcije u akutnoj fazi i sa simptomima njihovog prijelaza u kroni?nu;
• otkrivanje uzroka upalnih procesa nejasnog porijekla;
• neza?ti?eni slu?ajni i stalni seksualni kontakti;
• odre?ivanje osjetljivosti patogenog mikroorganizma na specifi?ne antibiotike;
• pacijenti sa sumnjom na latentnu infekciju radi otkrivanja patogena prije razvoja o?itih simptoma (predklini?ka dijagnoza);
• pacijenti za potvrdu oporavka nakon bolesti (retrospektivna dijagnoza);

Dijagnostika se tako?er koristi ako je potrebno precizno identificirati sljede?e patogene:

• virusi hepatitisa (A B C G), humana imunodeficijencija, citomegalovirus;
• vibrio kolera;
• herpes simplex virus, herpetiformne vrste;
• retro - adeno - i rinovirusi;
• virusi rubeole, Epstein-Barr, vari?ela (Zoster - virus);
• parvo i picornavirusi;
• bakterija Helicobacter pylori;
• legionela, patogene vrste Escherichia coli;
• staphylococcus aureus;
• patogen;
• klostridija, difterija i Haemophilus influenzae;

Koristi se i za odre?ivanje infekcija:

• Infektivna mononukleoza;
• borelioza, listerioza, krpeljni encefalitis;
• kandidijaza uzrokovana gljivicama Candida;
• seksualne infekcije - trihomonijaza, ureaplazmoza, blijeda treponema, gardnereloza, gonoreja, mikoplazmoza, klamidija;
• tuberkuloza.

Kontraindikacije za dr?anje

S obzirom da se zahvat ne izvodi sa pacijentom, bez ikakvog uticaja na organizam, ve? sa biolo?kim materijalom uzetim za istra?ivanje, nema kontraindikacija za PCR zbog odsustva potencijalne opasnosti.

Me?utim, uzimanje uzoraka biomaterijala iz cervikalnog kanala maternice se ne provodi nakon kolposkopije. Dostava briseva, struganja na analizu dozvoljena je tek 4 do 6 dana nakon zavr?etka menstruacije i potpunog prestanka iscjetka.

Da li je metoda sigurna

Nije mogu? negativan utjecaj na pacijenta u izoliranom prou?avanju njegovog biomaterijala u laboratoriju.

Priprema za zahvat (isporuka biolo?kih supstanci na analizu)

Kao uzorak za PCR analizu, u kojoj se otkriva DNK stranog patogena, koristi se svaka biolo?ka teku?ina, tkivo, tjelesni sekret. Uzorkovanje ispitivane tvari provodi se u obliku va?enja krvi iz vene, struganja iz larinksa, nosne ?upljine, uretre, pleuralne ?upljine, cerviksa.

Prije dijagnosti?ke procedure, doktor obja?njava pacijentu koji materijal ?e biti uzet:

1. Prilikom pregleda na spolne infekcije uzima se sekret iz genitalnih organa, urin i bris iz uretre.
2. Prilikom analize na herpeti?ne infekcije, citomegalovirus, mononukleozu - uzimaju urin, bris grla na analizu, za hepatitis, toksoplazmozu - krv iz vene.
3. Za dijagnosticiranje razli?itih tipova uzima se cerebrospinalna te?nost.
4. U pulmologiji uzorci za analizu su sputum i pleuralna te?nost.
5. Prilikom provo?enja studije o mogu?im intrauterinim infekcijama tijekom gestacije, za analizu se koriste amnionska teku?ina i stanice placente.

Pouzdanost i ta?nost analize zavisi od sterilnosti uslova pri uzimanju materijala. Budu?i da je PCR test visoko osjetljiv, svaka kontaminacija ispitivane tvari mo?e iskriviti rezultat.

Kompetentna priprema za isporuku biomaterijala ne predstavlja nikakve pote?ko?e za pacijente. Postoje odre?ene preporuke:

• prilikom analize na seksualne infekcije:
  • isklju?iti intimne kontakte 72 sata prije isporuke materijala;
  • prestanite koristiti bilo kakve vaginalne proizvode 3 dana;
  • od ve?eri prethodnog dana, ne vr?iti higijenu prou?avanog podru?ja;
  • isklju?iti mokrenje na 3-4 sata prilikom uzimanja uzorka iz uretre;
• prestati uzimati antibiotike mjesec dana prije testiranja na infekcije;
• davati krv ujutro prije jela i pi?a;
• Sakupljanje prve jutarnje porcije urina vr?i se u sterilnu posudu nakon temeljitog intimnog toaleta.

Pro?itajte vi?e o tome kako se dijagnostika provodi metodom lan?ane reakcije polimeraze.

Kako je procedura

Prilikom izvo?enja PCR studije iznova i iznova u reaktoru (poja?ava? ili termalni ciklus), odre?eni ciklusi se ponavljaju:

1. Prvi korak je denaturacija. Pljuva?ka, krv, biopsija, ginekolo?ki uzorci, sputum, u kojem se sumnja na prisustvo DNK (ili RNK) uzro?nika, stavlja se u poja?alo, gdje se materijal zagrijava i DNK dijeli u dva odvojena lanca.
2. Drugi korak je ?arenje ili lagano hla?enje materijala. i dodavanje prajmera koji mogu prepoznati ?eljene dijelove u molekuli DNK i vezati se za njih.
3. Tre?i korak je elongacija- javlja se nakon dodavanja 2 prajmera u svaki od lanaca DNK. Tokom procesa, fragment DNK patogena se dovr?ava i formira se njegova kopija.

Ovi ciklusi se ponavljaju poput "lan?ane reakcije", svaki put dovode?i do udvostru?avanja kopija odre?enog fragmenta DNK (na primjer, segmenta u kojem je programiran odre?eni virus). Za nekoliko sati formiraju se mnoge kopije fragmenta DNK i otkriva se njihovo prisustvo u uzorku. Nakon toga se rezultati analiziraju i upore?uju sa bazom podataka razli?itih tipova patogena kako bi se utvrdila vrsta infekcije.

O tuma?enju rezultata i zaklju?ku na osnovu PCR reakcije pro?itajte u nastavku.

De?ifrovanje rezultata

Kona?ni rezultat studije se izdaje 1-2 dana nakon predaje biolo?kog materijala. ?esto - ve? prvog dana nakon analize.

Kvalitativna analiza

• Negativno rezultat zna?i da u supstanci dostavljenoj na istra?ivanje nisu prona?eni tragovi infektivnih agenasa.
• Pozitivno rezultat zna?i otkrivanje patogenih virusa ili bakterija u biolo?kom uzorku s vrlo visokim stupnjem ta?nosti u trenutku podno?enja.

Ako je rezultat pozitivan, ali nema znakova aktivacije infekcije, ovo stanje tijela naziva se asimptomatskim "zdravim no?enjem". Naj?e??e se opa?a pri uzimanju biomaterijala sa odre?enog mjesta (cervikalni kanal, uretra, usna ?upljina) kod virusnih bolesti. Lije?enje u ovom slu?aju nije potrebno, ali je neophodan stalni medicinski nadzor, jer postoji mogu?nost:

• ?irenje virusa od nosilaca i infekcija zdravih ljudi;
• aktivacija procesa i prelazak bolesti u kroni?ni oblik.

Me?utim, ako je nalaz krvi pozitivan, to ukazuje da je infekcija zahvatila organizam i to vi?e nije nositeljsko stanje, ve? patologija koja zahtijeva hitnu specifi?nu terapiju.

Kvantitativna analiza

Kvantitativni rezultat odre?uje specijalist posebno za odre?enu vrstu infekcije. Na osnovu toga mogu?e je procijeniti stepen razvoja, stadijum bolesti, ?to omogu?ava pravovremeno propisivanje ispravnog lije?enja.

prosje?na cijena

Cijene za provo?enje polimerazne lan?ane reakcije odre?uju: vrsta studije, slo?enost identifikacije patogena, te?ina prikupljanja biolo?kog materijala, vrsta analize (kvalitativne ili kvantitativne), nivo cijene u laboratoriji.

S druge strane, u prou?avanju PCR-a mo?e se otkriti nekoliko patogena odjednom kada se uzima jedna vrsta materijala za analizu. Time se ?tedi na drugim laboratorijskim testovima.

Otprilike, cijena PCR analize u rubljama:

• gonococcus, gardnerella, trichomonas vaginalis - od 180
• chlamydia trachomatis - od 190
• papiloma virus - od 380 do 500
• biocenoza urogenitalnog trakta kod ?ena (kvantitativna i kvalitativna procjena mikroflore) - od 800.

Za vi?e korisnih informacija o PCR studiji, pogledajte video ispod:

PCR (lan?ana reakcija polimeraze) je dostignu?e molekularne biologije, jedna od glavnih metoda klini?ke laboratorijske dijagnostike kasnog 20. i po?etka 21. vijeka, koja donosi velike prednosti u razli?itim oblastima medicinske nauke.

Dakle, ?ak i ako me?u milijunima ?elija ljudskog tijela nije izgubljen sam ?ivi virus, ve? samo dio njegove DNK, tada ?e se PCR, ako ga ni?ta ne ometa, vjerojatno nositi sa zadatkom i prijaviti ostanak “stranca” sa pozitivnim rezultatom. Ovo je su?tina PCR-a i njegova glavna prednost.

Prednosti i nedostaci

Laboratorija koja obavlja PCR dijagnostiku podlije?e najvi?im zahtjevima u pogledu opreme, test sistema i kvalifikacija medicinskog osoblja. Ovo je visokotehnolo?ki laboratorij koji ima arsenal visoko osjetljivih i visoko specifi?nih reagensa, tako da nema posebnih nedostataka. Osim ako ne daje pozitivan rezultat u odsustvu klini?kih manifestacija, i samim tim stavlja klini?ara pred dilemu: isplati li se zapo?eti lije?enje ili ne?

Doktor koji promatra pacijenta po?inje sumnjati u pouzdanost rezultata testa, jer ne vidi nikakve znakove bolesti. Ali ipak, s obzirom na visoku osjetljivost PCR sustava, treba imati na umu da on otkriva patogen ?ak iu pretklini?koj fazi, a pozitivan rezultat u ovom slu?aju je vi?e prednost nego nedostatak. Na osnovu toga, ljekar koji je prisutan mora sam odlu?iti o prikladnosti terapije, uzimaju?i u obzir druge argumente za i protiv.

Prednosti dijagnostike pomo?u lan?ane reakcije polimeraze su o?igledne:

• Visoka specifi?nost, dosti?u?i 100%, zbog prisustva u odabranom uzorku ?estica nukleinske kiseline svojstvenih odre?enom organizmu, ali stranog ljudima;
• Visoke performanse, jer je PCR visokotehnolo?ka automatizirana tehnika koja pru?a mogu?nost testiranja na dan uzorkovanja materijala i na taj na?in osloba?a pacijenta od nepotrebnih briga;
• PCR, koji radi na jednom uzorku, mo?e provesti nekoliko studija i o otkriti vi?e patogena ako ona ima takav zadatak. Na primjer, prilikom dijagnosticiranja klamidijske infekcije, gdje je PCR jedna od glavnih metoda, uz klamidiju, mo?e se otkriti i Neisseria (gonokok) - patogen. ?tavi?e, to ne uti?e negativno na pouzdanost rezultata;
• PCR testiranje pokazuje opasne mikroorganizme u periodu inkubacije, kada jo? nisu imali vremena da nanesu opipljivu ?tetu organizmu, odnosno rana dijagnoza upozorava na predstoje?i razvoj patolo?kog procesa, ?to omogu?ava pripremu za njega i uzimanje u potpunosti naoru?anog.

Osim toga, kako bi se izbjegli nesporazumi koji ponekad nastaju prilikom dijagnostike, PCR se ?titi i ?injenicom da se njegovi rezultati mogu snimiti (fotografija, kompjuter) kako bi se po potrebi koristili u stru?ne svrhe.

Norma u PCR odgovorima se smatra negativnim rezultatom., ?to ukazuje na odsustvo fragmenata stranih nukleinskih kiselina, pozitivan odgovor ?e ukazati na prisutnost infekcije u tijelu, digitalne vrijednosti ozna?uju stanje virusa i njegovu koncentraciju u trenutku testiranja. Me?utim, kompletan transkript analize vr?i ljekar koji je pro?ao specijalnu obuku na temu "PCR". Poku?aj da sami interpretirate rezultate nema smisla, jer je mogu?e, ?to ?e se vjerovatno dogoditi, pogre?no shvatiti i po?eti brinuti unaprijed.

?ega se PCR „pla?i“, ?ta mo?e u?initi i kako se pripremiti za njega?

Kao i kod svake druge studije, ponekad su rezultati testa la?no pozitivni ili la?no negativni pri ?emu PCR nije izuzetak. To se mo?e dogoditi u sljede?im slu?ajevima:

1. Kr?enja tehnolo?kog procesa u jednoj od faza reakcije;
2. Nepo?tivanje pravila za prikupljanje materijala, njegovo skladi?tenje ili transport;
3. Prisutnost stranih ne?isto?a u materijalu.

To sugerira da se PCR - dijagnozi infekcija mora pristupiti pa?ljivo, pa?ljivo i precizno, ina?e uzorci materijala mogu promijeniti strukturnu strukturu ili ?ak propasti.

Faze PCR dijagnostike. La?ni rezultati mogu dati povrede u bilo kojoj fazi studije

PCR dijagnostika infekcija spada u kategoriju "zlatnih standarda" me?u ostalim laboratorijskim metodama, pa se mo?e koristiti za tra?enje uzro?nika mnogih bolesti koje na prvi pogled nemaju ni?ta zajedni?ko:

• Tuberkuloza razli?ite lokalizacije, upala plu?a (uklju?uju?i atipi?nu, uzrokovanu klamidijom);
• Dje?je infekcije (ospice, rubeola, parotitis, boginje);
• Difterija;
• salmoneloze;
• Zoonotska zarazna bolest - listerioza (bolest karakteriziraju razli?iti simptomi sa o?te?enjem limfnih ?vorova, centralnog nervnog sistema, unutra?njih organa);
• Bolesti uzrokovane prodiranjem Epstein-Barr virusa (infektivna mononukleoza itd.);
• Onkolo?ka patologija izazvana infekcijom papiloma virusom (HPV i njegovi tipovi);
• Borelioza (lajmska bolest, krpeljni encefalitis);
• Helicobacter pylori infekcija, ?iji je uzro?nik bakterija Helicobacter pylori koja ?ivi u ljudskom ?elucu. Dokazano je da Helicobacter izaziva razvoj karcinoma ?eluca ili dvanaestopala?nog crijeva;
• i prakti?no sve.

PCR dijagnostika spolno prenosivih infekcija je od posebnog zna?aja, jer na ovaj na?in uzrokovane bolesti ?esto dugo prolaze bez ikakvih klini?kih manifestacija, ali u trudno?i po?inju da se aktiviraju i na taj na?in ugro?avaju zdravlje, pa ?ak i ?ivot djeteta. . I pona?ajte se sli?no. Neki od njih („baklja“) su istovremeno povezani sa spolno prenosivim infekcijama, tako da potonje zahtijevaju detaljnije razmatranje. ?italac ?e se mo?i upoznati s najpopularnijim metodama u sljede?im odjeljcima ?lanka.

Kako se pravilno pripremiti da biste dobili pouzdan rezultat?

Odmah napominjemo da je priprema za PCR prili?no jednostavna i ne zahtijeva posebne napore od strane pacijenta. Samo trebate izvr?iti tri jednostavna zadatka:

1. Nemojte imati seksualne odnose 24 sata prije uzimanja testa;
2. Da uzmete i analizirate krv iz vene, morate do?i na prazan ?eludac, usput, ne mo?ete ni piti;
3. Urin treba mokriti no?u (ujutru - u sterilnu teglu kupljenu dan ranije u apoteci).

PCR mo?e raditi u bilo kojem biolo?kom okru?enju

PCR metoda nije "krvo?edna", stoga prihvata bilo koju biolo?ko okru?enje koje sadr?i sumnjivi infektivni agens. izbor - ?ta trebate uzeti za istra?ivanje ostaje na doktoru.

Dakle, u potrazi za patogenom, uz test krvi (iako je tako?er prikladan i u ve?ini slu?ajeva uzet paralelno s drugim materijalom), mo?ete koristiti:

• (iscjedak iz urogenitalnog trakta);
• Struganje sluznice usne ?upljine, konjunktive, nazofarinksa, genitalnog trakta (kod ?ena se uzimaju iz cerviksa i vagine, kod mu?karaca - iz uretre);
• pljuva?ka;
• sperma;
• sok od prostate;
• Tkiva posteljice i amnionska te?nost (amnionska te?nost);
• Sediment urina (nakon centrifugiranja), na primjer, za otkrivanje odre?enih spolno prenosivih infekcija i Mycobacterium tuberculosis;
• Sputum i pleuralna teku?ina za istu svrhu;
• eksudati;
• Cerebrospinalna te?nost u slu?aju sumnje na infektivnu leziju centralnog nervnog sistema;
• Biopsijski materijal (biopsija) uzet iz jetre, duodenuma, ?eluca itd.

Navedenom bih dodao da ?e u svim slu?ajevima, ?ak i kod struganja i sekreta, biti dovoljno materijala za testiranje, budu?i da PCR testiranje ne zahtijeva velike koli?ine, dovoljno je nekoliko mikrolitara za analizu, koji se obi?no uzimaju u Mikroepruveta tipa Eppendorf i poslata na prou?avanje.

Bolesti i upotreba PCR-a

HIV i lan?ana reakcija polimeraze

Obi?no, kada se pro?e anonimni pregled u slu?aju pozitivnih rezultata imunoblotinga, dijagnoza se ponovo ponavlja. Ako se dijagnoza potvrdi, pacijentu se propisuju dodatne studije:

1. Odre?ivanje, imunolo?kim reakcijama, apsolutne vrijednosti broja CD 4 limfocita (imunokompetentnih stanica - T-helpera ili pomaga?a), koje infekcija u prvom redu inficira, nakon ?ega gube osnovna svojstva i ne mogu razlikovati " sopstveni” i “strani”. Oni uzimaju RNK virusa koji cirkuli?e u krvnoj plazmi za normalne ?elije tela i ne reaguju na njih;
2. Detekcija virusne RNK PCR-om i izra?unavanje koncentracije virusnih ?estica kako bi se utvrdio stadij, te?ina patolo?kog procesa i prognoza na osnovu ovih podataka. Naravno, rije? "norma" u tom smislu ne postoji, jer je reakcija uvijek pozitivna, a dekodiranje digitalnih vrijednosti je u nadle?nosti doktora.

PCR i hepatitis

PCR metodom se mogu otkriti patogeni, naj?e??e se test koristi za dijagnosticiranje hepatitisa C, koji se drugim metodama slabo otkriva.

Virus hepatitisa C (koji sadr?i RNK) po svom pona?anju u ljudskom tijelu podsje?a na HIV. Zaglaviv?i se u genom ?elija jetre (hepatocita), on ostaje tamo ?ekaju?i u krilima, ?to mo?e do?i barem za 2 godine, barem za 20 godina, pa su ga doktori prozvali "nje?nim ubicom". Hepatitis C dovodi do stvaranja malignog procesa u parenhima jetre, koji se manifestuje u kasnijim fazama. Imuni sistem ne primje?uje sve ove doga?aje, grije?i virus sa hepatocitom. Istina, antitijela na virus se proizvode u odre?enim koli?inama, ali ne pru?aju pristojan imunolo?ki odgovor. Za dijagnosticiranje hepatitisa C, ELISA nije previ?e informativna, jer ukazuje da je virus ostavio tragove, a ne zna se da li se sam ostavio. Kod HCV-a su poznati slu?ajevi samoizlje?enja, dok antitijela protiv virusa ostaju i nastavljaju cirkulirati do?ivotno (imunolo?ka memorija). PCR je zna?ajno ispred formiranja antitijela i mo?e otkriti virusnu ?esticu ve? nakon 1-1,5 tjedana, dok se antitijela mogu pojaviti u rasponu od 2 mjeseca do ?est mjeseci

PCR dijagnostika u slu?aju sumnje na ?irenje virusa hepatitisa C u ljudskom tijelu je najoptimalnija metoda istra?ivanja, jer samo ona mo?e prepoznati prisustvo „nje?nog neprijatelja“ u krvi ili biopsiji jetre pacijenta.

Me?utim, ponekad postoje slu?ajevi kada su AT pozitivni, a PCR rezultat negativan. To se ponekad de?ava kada je koli?ina virusa vrlo mala ili kada je u stanju mirovanja u jetri bez ulaska u krvotok. Kako bi se ipak otkrila istina, pacijent se ponovo analizira, ili ?ak vi?e od jedne.

Infekcija papiloma virusom

Ako ne do?e do samoizlje?enja, mo?e, a da se ne ispolji, dugo opstati u organizmu doma?ina, koji ni ne sumnja, jer PCR nije ura?en, a nije bilo ni simptoma bolesti. Me?utim, prisutnost infekcije papiloma virusom, iako latentna, daleko je od indiferentne za ljudsko zdravlje, gdje su odre?ene vrste virusa koji uzrokuju rak (tipovi 16, 18) od posebne opasnosti.

Od HPV-a ?e??e boluje ?enska polovica populacije, jer virus vi?e voli ?ensko genitalno podru?je, a posebno grli? maternice, gdje neke vrste virusa doprinose nastanku displasti?nih procesa, a potom i raka grli?a materice, ako displazija nije tretiraju i virus se osloba?a. Dakle, polimerazna lan?ana reakcija ?e otkriti virusnu DNK, a zatim ukazati na "lo?" ili "dobar" (onkogeni ili neonkogeni) tip nastanjen u tijelu ?ene.

Druge SPI i TORCH infekcije

O?igledno, polimerazna lan?ana reakcija mo?e prona?i bilo koju stranu strukturu koja se sastoji od nukleinskih kiselina, tako da je ovaj test pogodan za otkrivanje svih spolno prenosivih bolesti i TORCH infekcija, me?utim, ne koristi se uvijek. Za?to, recimo, provoditi tako skupa istra?ivanja za otkrivanje ili gonokoka, ako postoje pristupa?niji i jeftiniji?

TORCH infekcije i spolno prenosive infekcije toliko su me?usobno povezane da je ponekad te?ko odrediti u koju grupu bi se odre?eni patogen trebao svrstati. Op?enito, mo?e biti te?ko razumjeti ih, jer se radi o prili?no raznolikim grupama mikroorganizama koji se uvijek mogu prenijeti spolnim putem ili samo pod odre?enim uslovima (imunodeficijencija), a mogu biti interesantni samo u trudno?i, zbog mogu?eg negativnog uticaja na njen tok i na fetus.

PCR je glavna metoda za otkrivanje latentnih infekcija

Razvoj klini?kih manifestacija zasniva se na razli?itim uzro?nicima, koji se mogu prona?i samo PCR-om, ?to je njegov glavni zadatak, ponekad zajedno sa ELISA-om, a ponekad kao jedini potvrdni test, posebno ako nema simptoma bolesti. Takvu te?ku situaciju mo?e stvoriti polimikrobna infekcija, koja osim o?iglednih patogena uklju?uje i oportunisti?ke patogene.

Ureaplazma se ?esto vi?a u tandemu sa mikoplazmom. I ovo nije slu?ajno. Ove vrste, poput klamidije, nisu ni virusi ni bakterije, ?ive unutar ?elija i pripadaju spolno prenosivim infekcijama, iako je njihovo prisustvo u zdravom tijelu tako?er daleko od neuobi?ajenog. Dakle, da bi se razlikovao zdrav nosilac od bolesne osobe, potrebne su posebne metode, gdje se PCR smatra najpouzdanijim, jer su, zbog posebnosti strukture i pona?anja ovih mikroorganizama, druge studije neu?inkovite.

?to se ti?e (tip 1, 2) i, koji tako?e pripada herpes virusima (tip 5), situacija je i ovdje dvosmislena. Stopa zaraze svjetske populacije pribli?ava se 100%, stoga je u ovom slu?aju vrlo va?na identifikacija virusa i njegova doza, ?to je posebno va?no u trudno?i, jer kod odrasle osobe virus koji se udoma?io u njegovom tijelo ?esto ne izaziva nikakve probleme i ne daje znakove bolesti.

Stoga ne treba zanemariti takav pregled koji je propisao lije?nik, jer je u nekim slu?ajevima polimerazna lan?ana reakcija obavezna i neophodna metoda laboratorijske dijagnostike koja mo?e za?tititi ne samo ?enu, ve? i malog, nero?enog mu?karca od ozbiljnih komplikacija.

U zaklju?ku, ?elio bih napomenuti da tako divna metoda kao ?to je PCR slu?i ?ovje?anstvu vi?e od 30 godina. Istovremeno, zadaci testa nisu ograni?eni na potragu za uzro?nicima zaraznih bolesti. Lan?ana reakcija polimeraze, ro?ena na tlu molekularne biologije, neraskidivo je povezana s genetikom, tj. uspje?no se koristi u forenzici za li?nu identifikaciju, u sudskoj medicini za utvr?ivanje o?instva, u veterini, ako ambulanta za ?ivotinje ima mogu?nost nabavke skupe opreme, kao i u drugim oblastima (industrija, poljoprivreda i dr.).

Video: PCR - su?tina i primjena

PCR analiza, malo ljudi zna ?ta je to, iako je to danas jedna od inovativnih metoda za dijagnosticiranje zaraznih bolesti, za koju je njen razvojnik dobio Nobelovu nagradu 1993. godine. Ova visokotehnolo?ka metoda omogu?ava vam da otkrijete ozbiljne bolesti u ranoj fazi i zapo?nete njihovo lije?enje na vrijeme.

Analiza se zasniva na principima molekularne biologije. PCR studija se sastoji u kori?tenju posebnog enzima koji pod utjecajem temperaturnih uvjeta kopira RNK i DNK bakterija i virusa prisutnih u prikupljenom biomaterijalu. Takva masovna reprodukcija omogu?ava lije?niku da to?no utvrdi kojoj vrsti pripada bakterija koja je izazvala bolest, kao i da izmjeri nivo njene koncentracije u biomaterijalu. Postupak kopiranja se provodi u posebnom aparatu - poja?iva?u, koji zagrijava i hladi epruvete sa prikupljenim materijalom, stvaraju?i pogodne uslove za replikaciju.

PCR istra?ivanje se provodi iz vi?e razloga, ali se naj?e??e koristi za utvr?ivanje prisutnosti zaraznih bolesti kao ?to su:

• herpes;
• genitalne infekcije - klamidija, ureaplazmoza, bakterijska vaginoza, trihomonijaza;
• kandidijaza;
• hepatitis;
• mononukleoza;
• listerioza;
• citomegalovirus;
• tuberkuloza;
• humani papiloma virus;
• krpeljni encefalitis.

PCR analiza nije ograni?ena na podru?je primjene u medicini, skrining se ?esto radi ako je potrebno razumjeti ko je vlasnik biolo?kog materijala prona?enog na mjestu zlo?ina, odnosno PCR analiza se ?iroko koristi u forenzici. Treba napomenuti da se bris ili krv za PCR uzimaju ako je potrebno o?instvo. Rezultati PCR dijagnostike nisu ni na koji na?in inferiorniji od uobi?ajene analize na DNK srodstvo, a mnogo je jeftiniji.

Karakteristike dijagnostike

PCR analiza ima ogroman broj pozitivnih aspekata. Prije svega, va?no je napomenuti osjetljivost testa. PCR analizator je u stanju da odredi molekule DNK bakterija ?ak i ako su oni malobrojni, odnosno doktor dobije informaciju o ranoj fazi bolesti ili nastanku hroni?nog oblika bolesti. PCR testom krvi mo?e se ?ak utvrditi prisutnost zarazne bolesti, koja je u latentnom obliku i ne odaje se sama od sebe.

Treba napomenuti da se PCR analiza kod mu?karaca i ?ena mo?e obaviti u prisustvu bilo koje vrste materijala, ne mora to biti krv ili bris, pljuva?ka, ?elije ko?e, pa ?ak i urin.

Rezultati PCR analiza mogu biti opse?ni, budu?i da PCR dijagnostika infekcija mo?e uhvatiti nekoliko patogena odjednom, koji se nalaze u jednom uzorku biomaterijala. Pregled se mo?e obaviti u bilo koje pogodno vrijeme, ?to analiza pokazuje da osoba mo?e saznati u kratkom vremenskom periodu, budu?i da su rezultati dijagnoze biomaterijala gotovi za 5 sati.

Svi lije?nici se sla?u da test krvi za PCR ili drugi materijal nikada ne daje la?ne rezultate ako se pravilno po?tuje dijagnosti?ka metodologija. PCR pozitivan ili PCR negativan mo?e biti la?an samo pod uslovom da laboratorijsko osoblje nema visok nivo profesionalizma. Ako je uklonjeni biomaterijal kontaminiran ili pogre?no pohranjen, tada dekodiranje PCR analize mo?e imati iskrivljene rezultate.

Priprema za dijagnostiku

PCR bris se kod ?ena uzima iz cerviksa ako je potrebno identificirati spolno prenosive bolesti, na primjer, klamidiju, ureaplazmu ili herpes. Ako mu?karac treba da izvr?i PCR na ove bakterije, onda mu se uzima iscjedak iz uretre – drugim rije?ima sok prostate. Krv se ispituje PCR-om ako se ?eli utvrditi hepatitis, toksoplazmoza i HIV. PCR analiza se radi na mononukleozu i citomegalovirus va?enjem brisa iz grla. Lan?ana reakcija polimeraze za prisustvo plu?nih infekcija provodi se uz prisustvo biomaterijala kao ?to je sputum ili pleuralna teku?ina.

PCR tokom trudno?e se radi ako postoji sumnja na intrauterine infekcije, kao i na bolesti i patologije fetalnog nervnog sistema. Kao biomaterijal za istra?ivanje, placentno tkivo se uzima iz trudnog tkiva. Ako osoba ima leziju nervnog sistema, ispituje se cerebrospinalna te?nost. Za odre?ivanje takve bakterije kao ?to je Helicobacter pylori, koriste se biopsije ?eluca i duodenuma.

Analiza urina PCR se tako?er ?esto koristi, ali je manje po?eljna od analize krvi. Omogu?ava vam da vidite prisutnost patogenih mikroorganizama koji izazivaju zarazne bolesti, ali ne mo?e ukazati na njihov ta?an broj i stupanj razvoja bolesti. PCR urina se koristi ako iz nekog razloga nije mogu?e vaditi krv ili napraviti bris. Tako?er treba napomenuti da se PCR urina mo?e koristiti za ispitivanje infekcija kod male djece. Analiza urina tako?er vam omogu?ava da utvrdite prisutnost infekcije i upale u mjehuru, utvrdite kamenje, pijesak, kao i cistitis i uretritis.

Kao ?to je gore spomenuto, mo?ete uzeti analizu za PCR u prisustvu bilo kojeg biomaterijala. PCR analiza, ?ta je to, znate, tako?e morate znati kako se pripremiti za dijagnozu. Priprema direktno ovisi o tome ?ta se povla?i, na primjer, potrebno je mokrenje nakon temeljne higijene genitalnih organa ujutro. Krv se daruje na prazan ?eludac, tokom darivanja, odnosno dan ranije, potrebno je odustati od upotrebe bilo kakvih lijekova. Ako postoje kroni?ne bolesti, popis odobrenih lijekova za upotrebu odlu?uje pojedina?no lije?nik.

Analiza izmeta se uzima ujutro nakon pa?ljive pripreme. Uo?i poro?aja potrebno je odbiti te?ku hranu i provesti temeljnu higijenu genitalnih organa. Analiza izmeta bit ?e nepouzdana ako je biomaterijal uklonjen klistirom, potrebno je prirodno spu?tanje materijala. Priprema za isporuku pljuva?ke nije potrebna, dovoljno je prestati pu?iti, piti sok od citrusa.

Prije predaje biomaterijala za utvr?ivanje bolesti koje se prenose tokom seksa, pacijenti su du?ni da isklju?e seksualni kontakt dva dana prije postavljanja PCR dijagnoze. ?enama nije dozvoljeno da uzimaju bris sa grli?a materice tokom kriti?nih dana dva dana nakon menstruacije, ina?e ?e PCR dekodiranje imati iskrivljene informacije.

Rezultati skrininga

Samo kvalificirani lije?nik mo?e detaljno objasniti ?ta takva PCR analiza govori o stanju odre?enog pacijenta, ne?e biti lako sami razumjeti podatke navedene u obrascu. Ako zatra?ite od doktora da de?ifruje podatke, on ?e prije svega re?i da li je rezultat pozitivan ili negativan. Ako je analiza negativna, onda je osoba zdrava, a u testnom materijalu nisu prona?ene bakterije. U slu?aju pozitivnog nalaza nazna?uje se ta?an tip patogena i njegova koli?ina, a po prisutnosti odre?enih imunoglobulina mo?ete saznati i ta?an period kada je infekcija bila.

Postoji nekoliko klasa imunoglobulina koji mogu jasno odra?avati stanje pacijenta:

1. IgG se razvija u krvi nakon 4 sedmice od infekcije i mo?e postojati u krvi do nekoliko godina. Nisu uvijek pokazatelji bakterija, ponekad djeluju kao uspomena na tijelo da je jednom nai?lo na sli?nu vrstu patogena.
2. IgM - pojavljuju se na samom po?etku nakon infekcije. Po pravilu su vidljivi ve? 5. dan, to su prvi branioci organizma koji napadaju bakteriju. Nestaju iz nalaza krvi nakon dvije sedmice. Ako su prisutni u testu krvi, onda se mo?e pretpostaviti da se infekcija dogodila sasvim nedavno, prije otprilike tjedan dana.
3. IgA signalizira akutni razvoj bakterijske infekcije u tijelu ili rekurentnu fazu kroni?ne bolesti.

Postoji niz slu?ajeva kada analiza pokazuje pozitivan rezultat, ali se osoba uop?e ne osje?a lo?e. To uop?e ne ukazuje na gre?ku u dijagnozi, ve? postoji kroni?ni oblik bolesti, koji je u stanju mirovanja ili je razvoj bolesti tek na po?etku. U ovom trenutku nema dovoljno bakterija koje mogu izazvati simptome.

Sada znate princip analize i mo?ete se prijaviti za ovu dijagnozu ako postoji najmanja sumnja na zaraznu bolest. Trajanje daljeg tretmana i njegova efikasnost direktno zavise od toga koliko brzo pro?ete dijagnozu, koja je prakti?no bezbolna. Kako biste stalno odr?avali svoje zdravlje na dobrom nivou, preporu?uje se preventivna PCR dijagnostika jednom godi?nje na prisustvo spolno prenosivih bolesti, kao i infekcija drugih organa. Bolje je sprije?iti bolest nego kasnije rje?avati njene posljedice.

U ve?ini slu?ajeva pacijenti se moraju suo?iti sa situacijom u kojoj je potrebna PCR dijagnostika da bi se ispitala ili utvrdila bolest. Va?no je razumjeti ?ta je to i za?to je potrebno.

Metoda lan?ane reakcije polimeraze (PCR) je studija koja poma?e u identifikaciji mnogih bolesti u po?etnim fazama razvoja. Njegova su?tina le?i u pronala?enju DNK ili RNK patogena prisutnog u tijelu. PCR vam omogu?ava da odredite patogen u slu?ajevima kada su druge vrste istra?ivanja neu?inkovite.

Popularnost ove metode le?i u njenoj jednostavnosti i ?irini upotrebe. Klini?ari ga koriste za dijagnosticiranje raznih bolesti. Omogu?uje vam brzo provo?enje slo?enih kvantitativnih i genomskih studija.

Jedna od najva?nijih medicinskih primjena klasi?ne PCR metode je otkrivanje mikroorganizama koji su sposobni uzrokovati patolo?ka stanja.

Su?tina PCR analize

PCR dijagnostika (koja se obja?njava molekularnom biologijom) je tehnika molekularnog kloniranja koja se koristi za analizu kratke sekvence DNK koja je prisutna u minimalnim koli?inama u uzorcima koji sadr?e bilo koji genetski materijal. Ova metoda se ?esto naziva "DNK kopirkom".

PCR dijagnostika se provodi in vitro (van tijela) u laboratoriji i zasniva se na prirodnom procesu duplikacije DNK prije njene podjele. Osim ?to mo?e otkriti virus, bakteriju ili drugi mikroorganizam u uzorku, PCR omogu?ava identifikaciju njihovog broja.

Kod bolesti kao ?to su hepatitis C ili infekcija virusom humane imunodeficijencije (HIV), virusno optere?enje je dobar pokazatelj gdje je bolest i koliko je efikasna terapija.

Naoru?ani ovim informacijama, lije?nici mogu odrediti kada lije?enje treba zapo?eti i kontrolirati proces. To vam omogu?ava da kreirate individualni pristup za svakog pacijenta.

PCR dijagnostika uklju?uje tri faze, u svakoj od kojih se koli?ina ciljne DNK zna?ajno pove?ava. Kao rezultat takve reakcije dobije se vi?e od milijardu kopija originalne ili "ciljane" DNK, ?to omogu?ava procjenu prisutnosti virusa u tijelu. Ovo je glavno svojstvo PCR metode.

Prednosti i nedostaci metode

PCR dijagnostiku (ono ?to je, gore opisano) detaljno je opisao Keri Mullis 1983. godine. Od tada je metoda vrlo popularna u laboratorijskoj praksi.

Glavne prednosti ove vrste istra?ivanja su:

• univerzalnost;
• brzina rezultata;
• velika vjerovatno?a dobivanja pouzdanih rezultata;
• specifi?nost;
• niz bolesti koje se mogu identifikovati.

Univerzalnost PCR metode le?i u mogu?nosti kori?tenja bilo kojeg ljudskog fiziolo?kog materijala. Za analizu je dovoljna i jedna dlaka.

Proces obrade podataka, zahvaljuju?i automatizaciji, mo?e trajati nekoliko sati. Specifi?nost se sastoji u izolaciji specifi?nog DNK fragmenta karakteristi?nog za odre?eni patogen. Uz pomo? PCR analize mogu se dijagnosticirati mnoge bolesti, kako u akutnoj tako i u latentnoj fazi.

Ali, unato? ogromnom broju prednosti, PCR dijagnosti?ka metoda ima i nedostatke:

• vjerovatno?a la?no pozitivnih rezultata;
• visoka osjetljivost;
• varijabilnost mikroorganizama.

Glavni nedostatak metode je nemogu?nost PCR-a da razlikuje ?ive mikroorganizme od mrtvih.. To se po pravilu odnosi na situaciju u kojoj treba procijeniti uspje?nost lije?enja. U ovom slu?aju, ako je bolest lije?ena, tada mrtve ?elije ostaju u ljudskom tijelu neko vrijeme, a potrebno je neko vrijeme od 4 do 6 sedmica da se potpuno obnove.

Visoka osjetljivost je prednost, a istovremeno i nedostatak. Neki mikroorganizmi su prisutni u malim koli?inama u tijelu. Stoga, u ovom slu?aju, ova dijagnosti?ka metoda nije informativna, te se preporu?uje kori?tenje drugih vrsta istra?ivanja.

Svaki mikroorganizam mo?e mutirati. I iako proces amplifikacije koristi odre?eni fragment koji je najmanje podlo?an promjenama, on i dalje mo?e dobiti mutacije i postati nevidljiv za test sistem. Ova situacija obja?njava ?injenicu da razli?iti sistemi laboratorijskih analiza mogu pokazati potpuno razli?ite rezultate.

U kojim oblastima se metoda koristi?

PCR studija se mo?e koristiti u klini?koj praksi za identifikaciju razli?itih bolesti. ?iroko se koristi u ginekologiji, urologiji, gastroenterologiji, onkologiji itd. Osim toga, efikasno se koristi u forenzici za utvr?ivanje identiteta i o?instva.

Ova vrsta studije koristi se u fazi planiranja i tokom trudno?e. Radi se analiza na TORCH infekciju kako bi se utvrdilo prisustvo infekcije u tijelu ?ene. Bolesti uzrokovane nekom od infekcija mogu biti blage za ?enu, ali uzrokovati ozbiljne uro?ene mane fetusa, sve do njegove smrti.

Tako?er, PCR dijagnosti?ka metoda poma?e u odre?ivanju genetske predispozicije osobe za razvoj odre?enih bolesti u budu?nosti.

Koje se infekcije otkrivaju PCR dijagnostikom

PCR metoda poma?e u identifikaciji virusa, bakterija i gljivica.

Naj?e??e bolesti koje se njime mogu dijagnosticirati:

Koji biolo?ki materijali se prou?avaju

S obzirom na bolest, simptome i ciljeve studije, PCR dijagnostika mo?e koristiti bilo koju fiziolo?ku teku?inu ili komad tkiva.

To mo?e biti:

• krv;
• pljuva?ka;
• sputum;
• urin;
• excreta;
• bris iz orofarinksa;
• komad zahva?enog tkiva;
• sinovijalna te?nost;
• struganje iz vagine kod ?ena ili iz uretre kod mu?karaca;
• ejakulirati;
• kosa i drugo.

Za bolesti genitourinarnog sistema uzima se urin, bris iz vagine kod ?ena ili iz uretre kod mu?karaca. Venska krv se donira za dijagnostiku bolesti kao ?to su HIV, hepatitis raznih vrsta, TORCH infekcije.

Kako bi se isklju?ila ili potvrdila onkologija, prilikom hirur?kih intervencija uklanjaju se komadi?i tkiva za biopsiju.

Kako se pripremiti za analizu

Karakteristike pripreme za studiju zavise od biomaterijala koji se podnosi. Tako?er treba imati na umu da je potrebno isklju?iti upotrebu antibiotika i drugih lijekova. Da biste pratili efikasnost lije?enja, trebali biste odr?avati interval nakon uzimanja lijekova najmanje 4 sedmice.

Krv se daje ujutro na prazan ?eludac. Urin i izmet moraju se staviti u apsolutno sterilnu posudu dizajniranu za to. Istovremeno, prije sakupljanja urina potrebno je provesti higijenu vanjskih genitalnih organa.

Ako se daje bris, morate:

• nemojte mokriti 3 sata;
• ne preporu?uje se pranje i ispiranje dan ranije (za ?ene);
• dan za prestanak seksualne aktivnosti;
• ?ene treba da uzmu bris u sredini ciklusa.

Faze PCR istra?ivanja

Prije po?etka PCR-a, DNK mora biti izolirana iz uzorka. Izolacija DNK je proces u vi?e koraka koji se mo?e izvesti ru?no ili instrumentalno.

Nakon pripreme uzorka, po?inje PCR proces u tri koraka:

• odvajanje ciljne DNK (denaturacija);
• amplifikacija (mno?enje) fragmenata DNK;
• detekcija (identifikacija) amplificiranih fragmenata DNK.

Prvi korak PCR-a naziva se denaturacija. Njegova su?tina le?i u ?injenici da se epruveta sa uzorcima DNK zagreva na visoke temperature (otprilike 90 stepeni). Zbog visokih temperatura, slabe veze izme?u nukleotida koji formiraju kod molekula su uni?tene. Kao rezultat toga, dvolan?ana DNK ili RNK se razdvaja u dva odvojena lanca.

Za "?isto?u" studije, biomaterijalu koji se prou?ava dodaje se posebna otopina koja otapa organske tvari. Trajanje ove faze zavisi od vrste materijala za ispitivanje i infektivnog agensa.

PCR dijagnostika (ono ?to je, gore opisano) u drugoj fazi umno?ava fragmente DNK na osnovu DNK same infekcije. PCR ne kopira svu nukleinsku kiselinu u uzorku. Kopira samo posebnu sekvencu genetskog koda, kratki fragment (prajmer).

U drugoj fazi, cijev se hladi.?itav PCR proces je automatiziran od strane ma?ine koja se zove termostat ili ciklusni ure?aj i mo?e se zavr?iti u roku od nekoliko sati. PCR ma?ina je programirana da mijenja temperaturu reakcione smjese svakih nekoliko minuta. To se doga?a tako da se kratki fragmenti mogu vezati za jednolan?ani ?ablon.

Amplifikacija se javlja u 30-40 ciklusa. Tokom ovog perioda, laboratorijski asistent kopira fragment DNK i lan?anom reakcijom pove?ava njegovu koli?inu. Tako se sa svakim ciklusom broj kopija pove?ava na nekoliko miliona ili ?ak milijardi.

U tre?oj fazi studije otkriva se prisustvo DNK virusa i bakterija. To se radi tako ?to se dobijena smjesa raspodjeljuje i dodaje joj poseban rastvor. Ova te?nost omogu?ava fragmentima DNK da dobiju odre?enu boju pod uticajem ultraljubi?astih zraka. To je pokazatelj da su patogeni mikrobi prisutni u ljudskom tijelu.

PCR tokom trudno?e

PCR dijagnostika (ono ?to je, gore opisano) mo?e se propisati prvi put u trudno?i, jer je to obavezna procedura. Ova metoda poma?e u prepoznavanju skrivenih infekcija i opasnosti od malformacija fetusa.

Za analizu koristite:

Postoje bolesti zarazne prirode koje mogu negativno utjecati na razvoj fetusa, uzrokuju?i defekte, uzrokuju?i prijevremeni poro?aj i poba?aje. Posebno su opasni u prvom tromjese?ju trudno?e i, u ve?ini slu?ajeva, medicinska su indikacija za poba?aj. Ove infekcije se zajedni?ki nazivaju TORCH kompleksom.

PCR analiza poma?e da se utvrdi prisustvo ili odsustvo infekcije u tijelu trudnice. ?esto se provodi u fazi planiranja trudno?e ili u prvom tromjese?ju. U slu?aju pozitivnog rezultata potrebno je ponovno testiranje. I tek nakon potvrde rezultata propisuje se odgovaraju?i tretman.

PCR za dijagnozu HIV-a

PCR metoda za dijagnosticiranje HIV infekcije je skup test i koristi se za posebne indikacije. To uklju?uje donaciju, a mo?e se prepisati i pacijentima povrije?enim u saobra?ajnoj nesre?i sa osobama sa HIV-om.

PCR poma?e da se identifikuje prisustvo infekcije u ranim fazama pre nego ?to telo razvije antitela na HIV. Rezultat sa visokim postotkom vjerovatno?e, studija mo?e pokazati ve? 5-14 dana nakon prodora virusa.

U drugim slu?ajevima, prisustvo virusa u ljudskom tijelu poma?e u uspostavljanju enzimskog imunosorbentnog testa (ELISA). Otkriva antitijela na HIV u krvi osobe, koja po?inju da se proizvode 1-3 mjeseca nakon infekcije. Kvantitativno odre?ivanje analize mikroorganizama neophodno je za kontrolu lije?enja pacijenata.

PCR za dijagnozu hepatitisa

Virusni hepatitis C je ozbiljna bolest koja mo?e dovesti do razvoja ciroze jetre. U periodu inkubacije, koji mo?e trajati i do 12 mjeseci, virus se nikako ne manifestira, pacijent prakti?ki nije zarazan, a virus se ne mo?e otkriti rutinskim testom krvi.

Naj?e??e, neblagovremenim lije?enjem, bolest postaje kroni?na i prijeti vi?estrukim komplikacijama.

Kod zaraze hepatitisom B, period inkubacije nije tako dug i prvi simptomi se mogu uo?iti nakon 4 sedmice. U tom periodu ELISA mo?e pokazati prisustvo virusa u tijelu.

PCR metoda omogu?ava:

• identificirati bolest u fazi razvoja inkubacije;
• rje?avaju upitne analize drugih studija;
• procijeniti efikasnost antivirusne terapije.

Odsustvo virusa hepatitisa DNK nakon tretmana je znak njegove efikasnosti.

Test na tuberkulozu

Razvoj tuberkuloze izaziva Kochov bacil, koji kapljicama iz zraka mo?e u?i u ljudsko tijelo. Bolest ima dva oblika: latentni i otvoreni. U prvom slu?aju zara?ena osoba nije nosilac infekcije i mikobakterije u sputumu se ne otkrivaju ni PCR-om. Ova forma i dalje ima opasnost, jer mo?e pre?i u otvorenu scenu.

Otvorena (aktivna) faza predstavlja opasnost za druge, ?ak i u slu?aju strogog pridr?avanja pravila li?ne higijene. Za dijagnosticiranje bolesti koriste se fluorografija, tomografija i rendgenski snimak grudnog ko?a. U tu svrhu koristi se i ko?ni tuberkularni test (Mantoux test). Ali najefikasnija metoda istra?ivanja je PCR.

Sljede?i uzorci se koriste kao uzorci za ispitivanje:

• krv;
• sputum;
• bronhijalna te?nost.

PCR za HPV dijagnozu

Dijagnoza HPV-a se vr?i u slu?aju simptoma bolesti, kao ?to su papilomi i bradavice u genitalnom podru?ju. Tako?er, studija se propisuje u fazi planiranja trudno?e, u slu?aju neplodnosti, poba?aja, kao iu situaciji infekcije jednog od partnera, jer je jedan od mehanizama preno?enja virusa seksualni.

Najopasnije nije sama prisutnost virusa u tijelu, ve? njegov tip. Neke od njegovih vrsta (16 i 18) su visoko onkogene i mogu uzrokovati rak grli?a materice kod ?ena. PCR metoda se mo?e propisati u kombinaciji s drugim vrstama istra?ivanja. Za analizu se naj?e??e koristi bris sa genitalnih organa. Krv, urin i vaginalni iscjedak rijetko se koriste kao biomaterijal.

Sa herpesom

Ovaj test dijagnosticira genitalnu infekciju virusom herpes simplex tipova 1 i 2 (HSV1/HSV2). Ako ste pozitivni na HSV2, trebali biste se testirati na HIV i druge spolno prenosive bolesti. Za analizu je potrebna pacijentova venska krv.
Urin, iscjedak i sadr?aj osipa tako?er se mogu pregledati ako su simptomi prisutni.

Sveobuhvatan PCR pregled

Ako postoje indikacije ili u svrhu prevencije bolesti, mo?e se propisati set testova PCR-om. Naj?e??e je inicijator sam pacijent, postoje slu?ajevi kada se propisuje sveobuhvatan pregled kako bi se sprije?ilo izbijanje odre?enih bolesti u odre?enoj regiji.

PCR-12 je sveobuhvatna studija koja pokriva sljede?e infekcije:

1. Hepatitis.
2. Herpes.
3. STD.
4. Tuberkuloza.
5. Encefalitis.
6. Kandidijaza.
7. Helicobacter infekcija.
8. Citomegalovirus.
9. Mononukleoza.
10. Onkovirusi.
11. Listerioza.

De?ifrovanje PCR analize

Nakon analize PCR-om mo?e se objaviti pozitivan ili negativan rezultat.

Preciznost PCR dijagnostike

U ve?ini slu?ajeva, PCR dijagnostika daje vrlo precizne rezultate. Ali u nekim slu?ajevima potrebne su dodatne metode istra?ivanja kako bi se potvrdila to?nost dijagnoze.

?ta mo?e uzrokovati la?an rezultat?

La?no pozitivni rezultati mogu biti rezultat nepo?tovanja pravila za prikupljanje analiza i provo?enje samog postupka istra?ivanja.

Sam pacijent mo?e biti krivac za la?ne informacije u slu?aju neadekvatne pripreme za isporuku biomaterijala. Opremljenost laboratorije i profesionalnost doktora mogu direktno uticati na rezultate studije.

Gdje dobiti PCR dijagnostiku

PCR dijagnostika se provodi u privatnim klinikama i laboratorijama po nalogu ljekara ili na inicijativu pacijenta u svrhu prevencije.
Prednost treba dati klinikama i laboratorijama sa savremenom opremom koje su ve? nekoliko godina na medicinskom tr?i?tu i koje su se dokazale.

PCR analiza: cijena i vrijeme

Ova dijagnosti?ka metoda je skupa. Njegova cijena se kre?e od 200 do 500 rubalja za svaku vrstu. Sveobuhvatan pregled na prisustvo nekoliko infekcija omogu?ava vam zna?ajnu u?tedu u odnosu na pla?anje svake pojedina?ne studije.

Trajanje studije ovisi o vrsti infekcije i mo?e trajati od 1 do 5 dana. Tako?e, ovi pokazatelji zavise od opremljenosti laboratorije i kvalifikacije medicinskog radnika.

PCR dijagnostika (ono ?to je detaljno opisano u ovom ?lanku) je najpreciznija i najbr?a metoda istra?ivanja. To je jedno od najva?nijih otkri?a u dvadesetom veku. u medicini.

Zahvaljuju?i ovoj metodi, postalo je mogu?e potpuno izlje?enje mnogih bolesti. Ali ne zaboravite da PCR ima neke nedostatke, a njegova u?inkovitost se ponekad pove?ava u kombinaciji s kori?tenjem drugih istra?iva?kih metoda.

Oblikovanje ?lanka: Vladimira Velikog

Video o PCR dijagnostici

O PCR ta?nosti: